| I类新城疫病毒NDV08-004株微型基因组的构建及其功能鉴定 |
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| 引用本文： | 陈云霞,管峰,赵云玲,郑东霞,张维,刘华雷,王志亮.I类新城疫病毒NDV08-004株微型基因组的构建及其功能鉴定[J].中国动物检疫,2011,28(9):27-31. |
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| 作者姓名： | 陈云霞 管峰 赵云玲 郑东霞 张维 刘华雷 王志亮 |
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| 作者单位： | 中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛,266032 |
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| 摘 要： | 目的本研究旨在构建Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004的微型基因组和辅助质粒,为构建病毒拯救体系奠定基础。方法根据Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004的全基因组序列,采用SOE方法将增强绿色荧光蛋白基因(eGFP)插入NDV08-004的3’-Leader和5’-Trailer区域之间后反向插入转录载体pOLTV5中,构建了NDV08-004的微型基因组pLGT-03。将pLGT-03转染辅助病毒NDV08-004感染的表达T7RNA聚合酶BSRT7/5细胞进行功能鉴定。采用RT-PCR将NDV08-004的NP、P和L蛋白基因亚克隆入表达载体pCI-neo中,分别构建了三个辅助质粒pCI-NP、pCI-P、pCI-L。通过构建的微型基因组pLGT-03和三个辅助质粒按照一定的比例共转染BSRT7/5细胞来验证辅助质粒的功能。结果微型基因组pLGT-03转染辅助病毒感染的BSRT7/5细胞后可见明显荧光,表明微型基因组构建成功。微型基因组和辅助质粒共转染可见荧光表达,表明三个辅助质粒均具有相应的功能。结论表明微型基因组和辅助质粒均具有相应的功能,为建立NDV08-004的反向遗传操作平台奠定了基础。
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| 关 键 词： | Ⅰ类新城疫病毒 辅助性质粒 微型基因组 病毒拯救 |
Construction and Identification of Mini-genome of Class I Newcastle Disease Virus NDV08-004 Strain |
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| Chen Yunxi,Guan Feng,Zhao Yunling,Zheng Dongxi,Zhang Wei,Liu Hualei,Wang Zhiliang.Construction and Identification of Mini-genome of Class I Newcastle Disease Virus NDV08-004 Strain[J].China Journal Of Animal Quarantine,2011,28(9):27-31. |
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| Authors: | Chen Yunxi Guan Feng Zhao Yunling Zheng Dongxi Zhang Wei Liu Hualei Wang Zhiliang |
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| Institution: | Chen Yunxia1,2,Guan Feng1,Zhao Yunling1,Zheng Dongxia1,Zhang Wei1,Liu Hualei1,Wang Zhilang1(1.China Animal Health and Epidemiology Center,Qingdao 266032,2.Guangxi University,Nanning 530005) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Newcastle disease virus （NDV） class I help-plasmid mini-genome rescue of virus |
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