| 乳酸菌素PlnJ第5位氨基酸(赖氨酸)定点突变对其热稳定性的影响 |
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| 引用本文： | 严梦涵,许丽惠,游泽龙,陆芍华,何晴,郑娱,许高琳,王全溪.乳酸菌素PlnJ第5位氨基酸(赖氨酸)定点突变对其热稳定性的影响[J].福建农林大学学报(自然科学版),2023(4):546-553. |
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| 作者姓名： | 严梦涵 许丽惠 游泽龙 陆芍华 何晴 郑娱 许高琳 王全溪 |
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| 作者单位： | 福建农林大学福建省兽医中药与动物保健重点实验室/中西兽医结合与动物保健福建省高等学校重点实验室 |
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| 基金项目： | 福建省自然科学基金项目(2019J01658)；;福建省教育厅中青年教师教育科研项目(JAT200106)； |
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| 摘 要： | 利用生物信息学软件I-Mutant2.0分析植物乳酸菌素PlnJ的氨基酸序列，筛选出最不稳定的氨基酸位点，进行定点突变，构建点突变重组表达质粒。对点突变重组表达质粒进行原核表达，并筛选表达最适条件；采用镍亲和层析法纯化重组蛋白。以大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌作为指示菌，探究100℃水浴加热0、5、15、30 min对重组PlnJ抑菌功能的影响。结果表明，PlnJ第3位氨基酸——赖氨酸(AAG)对其稳定性具有重大影响。以人工合成第5位氨基酸，即赖氨酸(AAG)突变为缬氨酸(GTG)的PlnJ核苷酸序列作为模板，成功构建重组表达质粒，PCR和酶切鉴定结果显示目的条带184 bp,测序后证明突变成功。重组蛋白诱导表达条件的优化结果表明：在37℃、12 h、0.8 mmol·L-1IPTG的最优诱导条件下，特异目的蛋白表达显著(27.5 ku);咪唑洗脱液浓度280 mmol·L-1是最优洗脱条件，可获得较为单一的目的蛋白。采用牛津杯抑菌试验法及麦氏比浊法比较突变前后的PlnJ蛋白的抑菌效果，结果表明，突变后的蛋白PlnJ(G5)]与突变前的...
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| 关 键 词： | 乳酸菌素PlnJ 热稳定性 原核表达 抑菌效果 |
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