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红鳍东方鲀Sirt1基因的克隆及其原核表达
引用本文:张 伟,杨志军,王 群.红鳍东方鲀Sirt1基因的克隆及其原核表达[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2012,40(8):54-59.
作者姓名:张 伟  杨志军  王 群
作者单位:华东师范大学 生命科学学院;东京大学 农学部 水产化学研究室;新乡医学院 基础医学院;新乡医学院 基础医学院;华东师范大学 生命科学学院
基金项目:国家留学基金委“国家建设高水平大学公派研究生项目”(2008614045)
摘    要:【目的】克隆红鳍东方鲀Sirtuin1(Sirt1)基因编码阅读框(ORF),并对其进行原核表达。【方法】采集红鳍东方鲀脂肪组织,提取其总RNA,采用RT-PCR方法扩增和克隆红鳍东方鲀Sirt1基因的ORF,构建其原核表达载体pET32a/Sirt1,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行表达。【结果】红鳍东方鲀Sirt1基因ORF区由2 070个核苷酸组成,编码689个氨基酸。根据红鳍东方鲀Sirt1ORF核苷酸序列推测的氨基酸序列与其他物种进行比对,发现其与罗非鱼(Oreochromis niloticus)、非洲齿鲤(Nothobranchius furzeri)、科恩氏假鳃鳉(Nothobranchius kuhntae)、斑马鱼(Danio rerio)、人(Homo sapiens)和小鼠(Mus musculus)的同源性分别为82%,82%,81%,66%,72%和69%;成功构建了重组质粒pET32a/Sirt1,用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果显示,在约105ku处有特异性的蛋白条带出现。【结论】克隆得到红鳍东方鲀Sirt1基因的ORF序列,并成功对其进行了原核表达。

关 键 词:红鳍东方鲀  Sirt1  基因表达  cDNA克隆  原核表达
收稿时间:2012/4/10 0:00:00

Cloning and prokaryotic expression of Sirt1 gene from torafugu Takifugu rubripes
Institution:ZHANG Wei1,2,3,YANG Zhi-jun3,WANG Qun1,WATABE Shugo2(1 School of Life Science,East China Normal University,Shanghai,200062,China;2 Department of Aquatic Bioscience,Graduate School of Agricultural and Life Sciences,The University of Tokyo,Tokyo,113-8657,Japan; 3 School of Basic Medical Science,Xinxiang Medical University,Xinxiang,He’nan 453003,China)
Abstract:
Keywords:Takifugu rubripes  Sirt1  gene expression  cDNA cloning  prokaryotic expression
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