| IBV单链抗体的筛选及其互补决定区序列变异分析 |
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| 引用本文： | 林 源,赵 蕾,王建敏.IBV单链抗体的筛选及其互补决定区序列变异分析[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2011,39(2):47-53. |
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| 作者姓名： | 林 源 赵 蕾 王建敏 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 动物医学院；上海交通大学 农业与生物学院，上海市动物生物技术重点实验室;上海交通大学 农业与生物学院，上海市动物生物技术重点实验室;上海交通大学 农业与生物学院，上海市动物生物技术重点实验室 |
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| 基金项目： | 上海交通大学-Raybiotech 联合抗体工程研究项目 |
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| 摘 要： | 【目的】筛选能表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)单链抗体(scFv)的原核阳性克隆,并分析scFv抗原结合位点的氨基酸变化。【方法】采用RT-PCR,从IBV疫苗免疫的鸡脾脏RNA中扩增出抗体编码基因的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因。利用重组链延伸反应(SOE-PCR),将linker与VH和VL基因相连构建鸡scFv基因,并将其克隆到原核表达载体pOPE101-XP中,构建重组质粒并转入大肠杆菌表达,间接ELISA筛选原核表达的抗IBVscFv的阳性克隆,对其测序后进行Clustal.W多序列比较,分析scFv骨架区(FR)和互补决定区(CDR)氨基酸序列差异。【结果】筛选到表达IBVscFv的阳性克隆ZL.10和ZL.80;将它们的氨基酸序列与鸡胚系Gemline进行多序列比较,结果显示,ZL.10、ZL.80在CDR中易变异氨基酸占各区氨基酸的比率均在40%以上,其中VH的CDR3达90%,VL的CDR3达60%。此外,ZL.10、ZL.80在VH的CDR3区分别增加5个和7个氨基酸。FR氨基酸变异率较少,且大多均在12%以下,而FR4未发生突变。【结论】通过体外筛选原核表达产物的方法,获得了表达IBVscFv的阳性克隆ZL.10和ZL.80,其VH、VL氨基酸序列中的变异主要发生在各自的CDR,二者VH的CDR3氨基酸序列差异很大,提示这2个scFv阳性克隆针对的是IBV不同的抗原位点。
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| 关 键 词： | 鸡传染性支气管炎病毒 单链抗体 筛选 抗原互补决定区 序列分析 |
| 收稿时间： | 2010/7/12 0:00:00 |
Screening and analysis of CDR of single chain variable fragment against infectious bronchitis virus |
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| LIN Yuan,ZHAO Lei,WANG Jian-min,LI Ben-qiang,ZHANG Ying,WANG Jian-hua,ZHU Jian-guo.Screening and analysis of CDR of single chain variable fragment against infectious bronchitis virus[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2011,39(2):47-53. |
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| Authors: | LIN Yuan ZHAO Lei WANG Jian-min LI Ben-qiang ZHANG Ying WANG Jian-hua ZHU Jian-guo |
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| Institution: | LIN Yuan1,2,ZHAO Lei2,WANG Jian-min2,LI Ben-qiang2,ZHANG Ying3,WANG Jian-hua1,ZHU Jian-guo2(1 College of Veterinary Medicine,Northwest A&F University,Yangling,Shaanxi 712100,China,2 College of Agriculture and Biology,Shanghai Jiaotong University,Key Laboratory of Animal and Biotechonology of Shanghai,Shanghai 200240,3 Raybiotech Inc.3607 Parkuay Lare,Suite 200,Norcross GA,USA 30092) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | infectious bronchitis virus sigle chain variable fragment screening complementary determinant region sequence analysis |
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