| 基于同源重组的产绿色荧光蚕丝转基因家蚕的制备 |
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| 引用本文： | 李静芝,曹广力,杨李阳,薛仁宇,黄元姣,贡成良.基于同源重组的产绿色荧光蚕丝转基因家蚕的制备[J].蚕业科学,2013(4):702-709. |
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| 作者姓名： | 李静芝 曹广力 杨李阳 薛仁宇 黄元姣 贡成良 |
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| 作者单位： | 苏州大学基础医学与生物科学学院;苏州大学现代丝绸国家工程实验室;广西医科大学基础医学院 |
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| 基金项目： | 国家重大基础研究发展计划“973”项目(No.2012CB-114600);江苏省农业三项工程项目[No.SXGC(2012)369];江苏省科技支撑项目(No.BE2010426);现代丝绸国家工程实验室开放课题;技术创新基金项目(No.L213401111) |
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| 摘 要： | 采用基因打靶技术对家蚕丝素蛋白基因(fib)进行分子设计与遗传改造,探讨从基因水平改良蚕丝性能的可行性。以家蚕丝素轻链基因(fib-L)终止密码子TAA上游1.2 kb(fib-LL)和下游0.5 kb(fib-LR)片段作为基因打靶载体的左右同源臂,将绿色荧光蛋白基因(gfp)插入到两同源臂的中间,并使其与fib-L基因处于同一读码框,构建基因打靶载体pSK-FibL-L-GFP-FibL-R。将该载体质粒转染BmN细胞后,荧光显微镜下观察细胞呈现绿色荧光,表明载体构建成功。将该载体质粒通过精子介导法导入家蚕品种高白的卵,在G0代筛选出茧呈绿色荧光的家蚕,并通过PCR检测证实其为转基因家蚕;用GFP抗体对G3代转基因家蚕幼虫后部丝腺组织进行Western blotting检测,有分子质量为65 kD的Fib-L-GFP融合蛋白特异性条带呈现。转基因家蚕所产蚕丝在蓝光的激发下发出绿色荧光,表明通过基因打靶将gfp导入了家蚕丝素轻链基因中,并成功实现融合表达。
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| 关 键 词： | 家蚕 基因打靶 绿色荧光蛋白基因 丝素轻链基因 融合表达 |
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