| 抗猪瘟病毒中和性单克隆抗体的制备与鉴定 |
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| 引用本文： | 刘运超,陈玉梅,冯丽丽,汪磊,王聚财,陆东峰,张改平.抗猪瘟病毒中和性单克隆抗体的制备与鉴定[J].河南农业科学,2019,48(12). |
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| 作者姓名： | 刘运超 陈玉梅 冯丽丽 汪磊 王聚财 陆东峰 张改平 |
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| 作者单位： | 河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点开放实验室,河南 郑州,450002;郑州大学 生命科学学院,河南 郑州,450001;河南省农业科学院 农业经济与信息研究所,河南 郑州,450002;河南花花牛实业总公司,河南 郑州,450006 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划;国家重点研发计划 |
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| 摘 要： | 为了获得具有中和活性的抗猪瘟病毒(CSFV)单克隆抗体,分别将CSFV和杆状病毒表达系统表达纯化的CSFV E2蛋白与佐剂混合后免疫BABL/c小鼠,经杂交瘤细胞融合制备抗CSFV单克隆抗体,经过多轮亚克隆和免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)筛选,成功获得5D1、8H7、9A1和13B2共4株能够稳定分泌抗CSFV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。4株单克隆抗体轻链均属于κ型,其中5D1、8H7、13B2为IgG1亚型,9A1为IgG2c亚型。间接ELISA检测结果显示,4株单克隆抗体的腹水效价在2.56×10~5～1.02×10~6;IPMA效价分别为6.40×10~4、1.28×10~5、2.56×10~5、1.28×10~5;SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,4株单克隆抗体均能与经原核表达系统及杆状病毒表达系统获得的CSFV E2蛋白发生特异性反应;IPMA检测结果显示,4株单克隆抗体均能与CSFV发生特异性反应,而与牛流行性腹泻病毒(BVDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒(PCV2)均无交叉反应。病毒中和试验证实,单克隆抗体13B2具有中和活性,其中和效价为1.28×10~4。综上,成功筛选出4株能够分泌抗CSFV特异性抗体的杂交瘤细胞株,其中单克隆抗体13B2具有中和CSFV感染活性。
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| 关 键 词： | 猪瘟病毒 E2蛋白 中和性单克隆抗体 抗体中和效价 免疫过氧化物酶单层细胞试验 |
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