| TaqMan探针荧光PCR检测副猪嗜血杆菌方法的建立和应用 |
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| 引用本文： | 罗宝正,王振全,薄清如,徐海聂,沙才华,廖秀云,陈伟生.TaqMan探针荧光PCR检测副猪嗜血杆菌方法的建立和应用[J].江苏农业学报,2011,27(6). |
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| 作者姓名： | 罗宝正 王振全 薄清如 徐海聂 沙才华 廖秀云 陈伟生 |
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| 作者单位： | 1. 珠海出入境检验检疫局国家外来病检测重点实验室,广东珠海,519015
2. 吉林大学农学部畜牧兽医学院,吉林长春,130062 |
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| 摘 要： | 为了建立基于TaqMan探针荧光PCR技术检测副猪嗜血杆菌的方法,本试验参考GenBank已发表的副猪嗜血杆菌(Hemophilus parasuis,HPS)转录起始因子infB基因序列,利用生物学软件Primer Express 2.0设计特异性引物和探针；并对副猪嗜血杆菌标准菌株提取DNA后进行PCR扩增,将产物测序鉴定后克隆到pMD1s-T载体,再转化到大肠杆菌感受态细胞,细菌培养后对菌液进行PCR扩增,把产物测序鉴定后获得的重组质粒作为标准阳性对照；最后将建立的TaqMan探针荧光PCR方法进行灵敏度、特异性、稳定性试验.结果显示,该检测方法可以达到1μl1.0×101拷贝数量级的灵敏度；另外,该方法可以将HPS和大肠杆菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪链球菌分开,特异性良好；稳定性试验显示,2次批内变异系数分别为0.65％和0.92％,批间变异系数为1.31％,稳定性良好.对口岸送检的56份猪肉和12份血浆蛋白粉样品进行检测,结果表明TaqMan探针荧光PCR方法和细菌分离方法的检测效果一致.
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| 关 键 词： | 副猪嗜血杆菌 荧光PCR 检测 |
Development and application of real-time PCR with TaqMan probe for detection of Hemophilus parasuis |
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| LUO Bao-zheng
,
WANG Zhen-quan
,
BO Qing-ru
,
XU Hai-nie
,
SHA Cai-hua
,
LIAO Xiu-yun
,
CHEN Wei-sheng.Development and application of real-time PCR with TaqMan probe for detection of Hemophilus parasuis[J].Jiangsu Journal of Agricultural Sciences,2011,27(6). |
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| Authors: | LUO Bao-zheng WANG Zhen-quan BO Qing-ru XU Hai-nie SHA Cai-hua LIAO Xiu-yun CHEN Wei-sheng |
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