| 摘 要： | 钴(Co)胁迫会对植物产生多种毒害作用。为研究其植物毒性作用机理,需构建Co胁迫条件下紫花苜蓿的实时荧光定量PCR反应体系。研究选取了6个持家基因(actin2,GAPDH,UBI,18S,MSC27,EF1-α)作为备选内参基因,以紫花苜蓿植株为实验材料,检测Co胁迫条件下备选内参基因的表达稳定性。通过RefFinder和geNorm软件分析,确定Co胁迫下紫花苜蓿最佳内参基因组合为actin2和18S。将四种根际促生菌分别接种紫花苜蓿,并使用100 mg/L CoCl_2对接种后植株进行处理,使用筛选内参引物检测生育酚合成关键基因尿黑酸叶绿醇转移酶(HPT)的转录水平。研究结果显示Co胁迫可使HPT基因转录水平发生显著下调,根际促生菌铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa 1401可降低Co胁迫对苜蓿植株的毒害作用,接种该菌株植株的HPT基因相对表达水平为对照样本的6.63倍,植株株高和生物量分别达到对照样本的140.86%和193.62%。根据测试样本中HPT基因转录水平与植株Co耐受能力的变化趋势,推测紫花苜蓿的Co耐受能力增强与生育酚的合成途径调控或存在紧密联系。
|
