| 牛奶子实时定量PCR分析中内参基因的评价与验证 |
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| 引用本文： | 成龙平,胡海涛,郭卫东,杨莉,王长春,杨玲.牛奶子实时定量PCR分析中内参基因的评价与验证[J].林业科学,2015(5). |
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| 作者姓名： | 成龙平 胡海涛 郭卫东 杨莉 王长春 杨玲 |
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| 作者单位： | 浙江师范大学化学与生命科学学院 金华 321004 |
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| 基金项目： | Funded project:The National Natural Science Foundation of China，The Science and Technology Department of Zhejiang Province，The Zhejiang Normal University Innovative Research Team Program． |
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| 摘 要： | 【目的】实时定量 PCR结果的精确性在很大程度上取决于选择的内参基因的稳定性。通过评估候选管家基因的表达稳定性，筛选出用于牛奶子研究的最佳内参基因。【方法】设计简并引物从牛奶子中克隆12个潜在的内参基因片段，包括14-3-3、18S核糖体 RNA(18SrRNA)、β-actin (Actin)、延长因子1-α(EF1-α)、真核起始因子4A (eIF4A)、3－磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、RNA聚合酶－Ⅱ(RPⅡ)、60S核糖体蛋白(RPL7)、翻译延长因子2(TEF2)、泛素连接酶 E2(UBCE)、泛素(UBQ)和泛素延伸蛋白5(UBQ5)。采集牛奶子5个不同器官(根、茎、叶、花和红果)、4个成熟期的果实(绿果、黄果、深粉果和完全成熟的红果)、2种激素(脱落酸、赤霉素)处理4个时间点的绿果、热处理4个时间点的离体叶片、幼苗盐胁迫2个时间点的根茎叶，应用实时荧光定量 PCR 技术检测12个内参基因在各样品中的表达情况，采用基于 CT值的 geNorm、Normfinder和 BestKeeper及 CT比较4种算法评价这些内参基因的稳定性，最终的排名则由 RefFinder算法产生。【结果】器官组稳定性好的前2位内参基因为 UBCE和 RPL7，果实成熟期组排名前2的为eIF4A和UBCE，激素处理组排名前2的为eIF4A和UBCE，非生物胁迫组排名前2的则为 Actin和 EF1-α，综合分析所有样品排名前3位的是 eIF4A、RPL7和 UBCE。分别用筛选出的稳定的eIF4A、RPL7、UBCE和不稳定的 RPⅡ作为内参基因评价目的基因八氢番茄红素合成酶基因 EutPsy 在果实成熟过程中的表达，结果显示分别以3个稳定的内参基因为单内参基因与以 eIF4A 同 UBCE 组合做内参基因所得到的结论一致，而 RPⅡ给出的则不同。【结论】在应用荧光实时定量 PCR技术研究牛奶子基因转录表达时，通常情况下eIF4A、RPL7和 UBCE相对于其他9个候选内参基因更为可靠。研究结果为牛奶子及胡颓子属其他物种的基因表达分析奠定基础。
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| 关 键 词： | 牛奶子 基因表达 实时定量 PCR 标准化 内参基因 |
Evaluation and Validation of Potential Reference Genes for Quantitative Real-Time PCR Analysis in Elaeagnus umbellata |
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| Cheng Longping,Hu Haitao,Guo Weidong,Yang Li,Wang Changchun,Yang Ling.Evaluation and Validation of Potential Reference Genes for Quantitative Real-Time PCR Analysis in Elaeagnus umbellata[J].Scientia Silvae Sinicae,2015(5). |
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| Authors: | Cheng Longping Hu Haitao Guo Weidong Yang Li Wang Changchun Yang Ling |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Elaeagnus umbellata gene expression qRT-PCR normalization reference gene |
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