| 奶牛γ-干扰素基因的克隆及其在COS-1细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 许金俊,秦爱建,金文杰,刘岳龙.奶牛γ-干扰素基因的克隆及其在COS-1细胞中的表达[J].农业生物技术学报,2004,12(3):273-277. |
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| 作者姓名： | 许金俊 秦爱建 金文杰 刘岳龙 |
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| 作者单位： | 扬州大学畜牧兽医学院,扬州,225009 |
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| 基金项目： | 江苏省"333"工程人才培养基金资助. |
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| 摘 要： | 应用RT—PCR技术从经体外植物血凝素(PHA)刺激诱导的奶牛外周血淋巴细胞的总RNA中扩增出牛γ-干扰素(bovine interferon-γ,BovIFN-γ)基因。将扩增出的BovIFN-γ克隆到PMD18-T载体中,经过限制性酶切分析筛选正向插入的克隆。测序结果表明,所克隆到的基因编码区序列与已报道基因存在3个核苷酸的差异。将该基因片段从PMD18-T载体中用Hind Ⅲ和BamH Ⅰ双酶切后克隆到真核表达载体pcDNA3．1／zeo ( )中,构建真核表达载体pcDNA—BovIFN-γ,通过脂质体转染COS-1细胞,用鼠抗BovIFN-γ高免血清和FITC标记的羊抗鼠IgG进行间接免疫荧光实验(IFA)检测,结果表明,在COS—1细胞的细胞膜和胞浆内均有rBovIFN-γ表达,细胞病变抑制实验证实,转染后细胞培养上清液具有一定的干扰素活性,转染后72h细胞培养上清液在MDBK细胞上抑制VSV病毒的效价可达到128IU／mL。研究结果为进一步筛选稳定表达BovIFN-γ基因细胞系、开发奶牛疾病预防控制的新产品以及开展奶牛疾病的基因治疗奠定了基础。
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| 关 键 词： | 奶牛 γ-干扰素 基因 克隆 COS-1细胞 表达 植物血凝素 |
| 修稿时间： | 2003年5月26日 |
Cloning of Bovine Interferon-gamma Gene and Its Expression in COS-1 Cells |
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