| 牛Toll样受体实时荧光定量PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 韩猛立,黄新,何延华,宋天增,薄新文,钟发刚.牛Toll样受体实时荧光定量PCR检测方法的建立[J].农业生物技术学报,2011,19(3). |
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| 作者姓名： | 韩猛立 黄新 何延华 宋天增 薄新文 钟发刚 |
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| 作者单位： | 1. 新疆生产建设兵团绵羊繁育生物技术重点实验室,石河子,832000;石河子大学动物科技学院,石河子,832003
2. 新疆生产建设兵团绵羊繁育生物技术重点实验室,石河子,832000 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规划(973)前期研究专项，国家自然基金项目，兵团博士资金项目，新疆农垦科学院青年科学基金项目 |
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| 摘 要： | 建立检测牛Toll样受体(TLRs)mRNA表达水平的SYBR GreenI实时荧光定量PCR方法.根据GenBank中BoTLR-2、3、4、5、7、8和10的基因序列,在其保守区设计并合成各自特异性引物,以牛3-磷酸甘油脱氢酶基因(GAPDH)为内参,建立实时荧光定量PCR方法.结果表明,在1×102～1×109 copies/μL范围内,BoTLRs和GAPDH基因的Ct值与阳性质粒的浓度均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991.溶解曲线分析表明,产物为特异的单峰,具有较高的灵敏度和特异性.重复性结果表明,TLRs和GAPDH基因阳性质粒,最小检出浓度达到100和10 copies/μL,组内、组间变异系数值均保持在3.5%以内.临床样品检测结果表明,TLR3和TLR8 mRNA水平在诱导培养早期较高,在4 h达到高峰,而TLR4和TLR7水平与之相反,在诱导培养后期较高,在24 h达到高峰,表明本研究所建立的检测方法成功用于临床样品的检测,为在mRNA水平对BoTLRs的定量分析提供技术平台.
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| 关 键 词： | 牛 Toll样受体 外周血单核细胞 实时荧光定量RT-PCR SYBR-Green I |
Establishment of a Real-time Fluorescent Quantitative PCR Assay for Detection of Bovine Toll-like Receptors Genes |
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| Han Mengli,Huang Xin,He Yanhua,Song Tianzeng,Bo Xinweng,Zhong Fagang.Establishment of a Real-time Fluorescent Quantitative PCR Assay for Detection of Bovine Toll-like Receptors Genes[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2011,19(3). |
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| Authors: | Han Mengli Huang Xin He Yanhua Song Tianzeng Bo Xinweng Zhong Fagang |
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