| 利用CRISPR/Cas9 技术定向编辑加工番茄 SlACS2 |
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| 引用本文： | 刘江娜,张西英,白云凤,张爱萍.利用CRISPR/Cas9 技术定向编辑加工番茄 SlACS2[J].西北农业学报,2023(6):910-918. |
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| 作者姓名： | 刘江娜 张西英 白云凤 张爱萍 |
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| 作者单位： | (新疆生产建设兵团 第六师农业科学研究所,新疆五家渠 832100) |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31760571，32160710);兵团科技人才创新计划(2021CB037)；第六师科技计划(1903)。 |
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| 摘 要： | 加工番茄为呼吸跃变型果实，伴随呼吸跃变产生大量乙烯，即系统Ⅱ乙烯，易使番茄果实过熟，腐烂变质。 SlACS2 是番茄系统Ⅱ乙烯合成的限速酶，旨在通过 CRISPR-Cas9 基因组编辑系统修饰该基因，调控系统Ⅱ乙烯过量表达，以迟滞番茄过熟腐烂。利用 CRISPR/Cas9 系统定点编辑加工番茄 SlACS2基因，在 SlACS2的第2外显子区域设计 2个靶位点，构建双靶点的CRISPR/Cas9 敲除载体，通过农杆菌介导法转化加工番茄,再生培养获得T0代转基因幼苗，通过PCR 扩增卡那霉素抗性基因获得阳性株系。为进一步获得纯合突变，对T1代植株的双靶位点区域进行PCR 扩增和测序分析，鉴定 SlACS2突变类型。结果发现，从阳性植株的T1后代中鉴定出6种在两个靶位点发生纯合突变类型植株，其中靶位点1突变类型较为丰富，分别发生单碱基的插入及1个、4个、5个和9个碱基的缺失；靶位点2则只有7个碱基的缺失一种编辑类型。结果表明,已成功在加工番茄体内实现对内源 SlACS2的定点敲除,获得的基因编辑植株，为进一步筛选耐贮突变体提供材料基础。
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| 关 键 词： | CRISPR/Cas9 加工番茄 基因编辑 SlACS2 |
Targeted Editing of SlACS2 by CRISPR/Cas9 Technology in Tomato |
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| LIU Jiangn,ZHANG Xiying,BAI Yunfeng and ZHANG Aiping.Targeted Editing of SlACS2 by CRISPR/Cas9 Technology in Tomato[J].Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica,2023(6):910-918. |
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| Authors: | LIU Jiangn ZHANG Xiying BAI Yunfeng and ZHANG Aiping |
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