| 牛皮蝇HA基因克隆及分泌型真核表达载体的构建 |
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| 引用本文： | 陈仁金,胡安康,王珍珍,袁红花,张腾业,吴连连,朱裕华,朱孝荣.牛皮蝇HA基因克隆及分泌型真核表达载体的构建[J].黑龙江畜牧兽医,2014(3):28-30,34. |
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| 作者姓名： | 陈仁金 胡安康 王珍珍 袁红花 张腾业 吴连连 朱裕华 朱孝荣 |
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| 摘 要： | 为了构建牛皮蝇的皮蝇素A(hypodermin A,HA)基因的分泌型真核表达载体pEF1α-HAAcGFP,并在Cos7细胞中表达与鉴定,试验从牛皮蝇中提取RNA,反转录成cDNA,扩增出HA基因,并在HA基因序列的上游加1段信号肽序列;通过双酶切将带有信号肽的HA基因序列克隆到真核表达载体pEF1α-IRES-AcGFP中,得到分泌型真核表达载体pEF1α-HA-AcGFP;再利用脂质体法转染Cos7细胞,并以RT-PCR和Western-blot技术在RNA和蛋白水平上检测HA基因是否在Cos7细胞中表达。结果表明:经双酶切及测序鉴定,分泌型真核表达载体pEF1α-HA-AcGFP构建成功;转染Cos7细胞后,在RNA和蛋白水平上能检测到HA基因的表达。说明成功构建了HA基因的分泌型真核表达载体PEF1α-HA-AcGFP。
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