| 柱花草AFLP反应体系的建立与引物筛选 |
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| 引用本文： | 韩蓉蓉,曾黎琼,史亮涛,刘国道,何光熊,文亦芾,金 杰.柱花草AFLP反应体系的建立与引物筛选[J].热带作物学报,2014,34(4):46-52. |
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| 作者姓名： | 韩蓉蓉 曾黎琼 史亮涛 刘国道 何光熊 文亦芾 金 杰 |
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| 作者单位： | 1 云南农业大学动物科学技术学院 云南昆明 650201；2 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所/云南省农业生物技术重点实验室/农业部西南作物基因资源与种质创制重点实验室 云南昆明 650223;2 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所/云南省农业生物技术重点实验室/农业部西南作物基因资源与种质创制重点实验室 云南昆明 650223;3 云南省农业科学院热区生态农业研究所 云南元谋 651300;4 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 海南儋州 571737;3 云南省农业科学院热区生态农业研究所 云南元谋 651300;1 云南农业大学动物科学技术学院 云南昆明 650201;3 云南省农业科学院热区生态农业研究所 云南元谋 651300 |
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| 摘 要： | 以柱花草奥克雷品种为材料，采用改良的CTAB法提取基因组DNA，对影响AFLP反应体系的主要因素进行了优化，建立了柱花草的AFLP反应体系。结果表明：20 μL为最佳反应体系，酶切体系中DNA模板量为1 000 ng，用5 U EcoR I 37℃酶切2 h、5 U Mse I 65℃酶切2 h效果最佳；分别取5 μL酶切液、1 μL T4连接酶(5 μL/L)、1 μL EcoR I接头、1 μL Mse I接头、2 μL缓冲液(T4DNA酶自带)，于22℃下连接10 min效果最佳；预扩增体系中模板稀释15倍、Mg2+浓度为0.75 mmol/L、Taq酶用量为1 U、dNTPs浓度为0.2 mmol/L、引物浓度为2 ng/μL效果最佳；选择扩增体系中模板稀释20倍、Mg2+浓度为1.25 mmol/L、Taq酶为1 U、dNTPs浓度为0.225 mmol/L、引物浓度为0.4 ng/μL效果最佳。利用热研5号、奥克雷2个品种对8对引物组合进行筛选，筛选出46对引物组合，为利用AFLP标记对柱花草进行分子生物学研究及分子育种奠定基础。
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| 关 键 词： | 柱花草 DNA AFLP 引物筛选 |
Establishment of AFLP Reaction System in Stylosanthes guianensias and Its Primer Selection |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Stylosanthes guianensis DNA AFLP primer selection |
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