| 非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型双重SYBR Green Ⅰ荧光PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 于新友,李天芝,王金良,姚春阳,沈志强.非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型双重SYBR Green Ⅰ荧光PCR检测方法的建立[J].中国兽医学报,2022(5):862-866. |
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| 作者姓名： | 于新友 李天芝 王金良 姚春阳 沈志强 |
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| 作者单位： | 1. 山东绿都生物科技有限公司;2. 山东省滨州畜牧兽医研究院 |
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| 摘 要： | 为建立同时检测非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪圆环病毒2型(PCV2)核酸的荧光PCR方法，试验根据GenBank中ASFV的p72基因和PCV2的ORF1基因序列，分别设计特异性引物，通过对加样体系和扩增程序的优化，建立了检测ASFV和PCV2的双重SYBR GreenⅠ荧光PCR方法，并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行评价，最后对收集的临床样品进行检测。结果表明，最终确立的20μL反应体系中各引物最佳添加量为：F1 0.7μL、R1 1.0μL、F2 0.8μL和R2 1.5μL;优化后的扩增反应程序为：95℃预变性3 min; 94℃变性5 s, 54℃退火20 s (此处收集荧光),40个循环。该方法具有很好的特异性，不与其他常见猪病原体发生交叉反应。检测ASFV和PCV2的灵敏度分别可达5.6 copies/μL和3.2 copies/μL,Tm值的批内和批间变异系数均不高于1.0%,对14份临床样品的检测结果与参比方法一致。本研究所建立ASFV和PCV的双重SYBR GreenⅠ荧光PCR方法敏感性高，特异性好，可用于临床2种疾病的快速检测。
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| 关 键 词： | 非洲猪瘟病毒 猪圆环病毒 SYBR Green Ⅰ 荧光PCR |
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