| 猪CTSD全长cDNA的克隆和表达分析 |
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| 引用本文： | 梅盈洁,李加琪,陈瑶生,李晓筠,朱良瑞,凌飞,王翀,张豪.猪CTSD全长cDNA的克隆和表达分析[J].畜牧兽医学报,2007,38(5):432-436. |
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| 作者姓名： | 梅盈洁 李加琪 陈瑶生 李晓筠 朱良瑞 凌飞 王翀 张豪 |
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| 作者单位： | 华南农业大学动物科学学院,广州,510642 |
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| 基金项目： | 广东省自然科学基金团队项目（04205804）;国家“973”计划（2006CB102101） |
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| 摘 要： | 以人CTSD mRNA全长序列为基序,在db EST库中搜索同源性大于80%、重叠大于40个碱基的猪EST下载经Seqman软件装配后,利用RT-PCR扩增到猪CTSD基因部分cDNA序列,进一步通过RACE技术获得cDNA全长（GenBank登录号为DQ018727）,猪CTSD基因cDNA全长2032 bp包括93 bp 5′UTR区、706 bp 3′UTR区和1 233bp ORF,编码410个氨基酸残基。其编码区与人、鼠、牛、羊CTSD编码区同源性分别为87.9%、78.2%、86.6%和85.0%,其氨基酸序列与人、鼠、牛、羊氨基酸序列同源性分别为86.6%、80.1%、86.0%和84.7%。疏水性分析和信号肽预测发现猪CTSD氨基酸序列存在至少7个疏水性区域,信号肽位点为第1-20个氨基酸残基。在NCBI进行Blast P搜索结果显示猪CTSD氨基酸结构中含有Asn（Asparagine,天门冬酰胺）结构域,与天冬氨酸蛋白酶3D结构同源性高达99.7%,具有真核生物天冬氨酸蛋白酶的典型结构。以猪多组织RNA池为模板,以1026 bp部分cDNA序列作为杂交探针进行Northern杂交,得到一条2000 bp左右特异条带,从而验证了RACE产物为全长cDNA并揭示该基因只有一个转录本。为了研究猪CTSD基因在体内不同组织内表达的特点,采用半定量RT-PCR对CTSD基因在猪10个组织中的表达进行研究,结果表明在10个组织中均有表达,且表达量与-βactin内参接近。
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| 关 键 词： | 猪 溶酶体组织蛋白酶D 电子克隆 快速扩增cDNA末端 全长cDNA |
| 文章编号： | 0366-6964（2007）05-0432-05 |
| 修稿时间： | 2006-03-03 |
Cloning and Expression of Porcine Cathepsin D Gene Full-length cDNA |
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| MEI Ying-jie,LI Jia-qi,CHEN Yao-sheng,LI Xiao-yun,ZHU Liang-rui,LING Fei,WANG Chong,ZHANG Hao.Cloning and Expression of Porcine Cathepsin D Gene Full-length cDNA[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2007,38(5):432-436. |
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| Authors: | MEI Ying-jie LI Jia-qi CHEN Yao-sheng LI Xiao-yun ZHU Liang-rui LING Fei WANG Chong ZHANG Hao |
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| Institution: | College of Animal Science and Technology, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | porcine cathepsin D in silicon cloning RACE full-length cDNA |
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