| 萨能奶山羊β-防御素-3基因的克隆、序列分析及差异表达 |
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| 引用本文： | 茹 坤,苏 峰,张一军,刘 军,罗 艳,徐乔璐,贺晓丽,林小湲,郑月茂,张 涌.萨能奶山羊β-防御素-3基因的克隆、序列分析及差异表达[J].西北农业学报,2014,23(7):1-6. |
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| 作者姓名： | 茹 坤 苏 峰 张一军 刘 军 罗 艳 徐乔璐 贺晓丽 林小湲 郑月茂 张 涌 |
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| 作者单位： | （西北农林科技大学 动物医学院，陕西杨凌 712100） |
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| 基金项目： | 国家转基因生物新品种培育重大专项（2013zx08007-004）。 |
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| 摘 要： | β-防御素-3(BD-3)基因在乳腺炎病程中有重要作用,目前尚未见有关山羊BD-3基因的研究报道,根据已发表的牛的BD-3基因序列的编码区(CDS)设计引物,经RT-PCR、连接T载体、挑取克隆和测序,成功克隆出长度为210bp的萨能奶山羊BD-3基因CDS区,并提交至GenBank。分析该CDS区的核苷酸和氨基酸序列,结果表明,所得核苷酸序列与牛、人的序列同源性分别为91.2%和80.9%;其氨基酸序列在萨能奶山羊BD-3蛋白的功能结构域(含23~67个氨基酸)与人的结构域同源性为99.9%,蛋白质三级结构相似。分别用热灭活的金黄色葡萄球菌、停乳链球菌、大肠杆菌对乳腺上皮细胞刺激0、2、4、6、8h,观察BD-3基因的mRNA水平变化,结果显示,金黄色葡萄球菌刺激4h后,BD-3表达量达到最高,与对照组相比差异极显著(P0.01);停乳链球菌刺激后,BD-3表达量持续升高,8h时与对照组差异极显著(P0.01);大肠杆菌刺激后,BD-3表达量逐渐升高,4h时达到最高,但与对照组差异不显著,之后表达量逐渐下降。成功克隆出山羊BD-3基因,并且在金黄色葡萄球菌、停乳链球菌的刺激下有较高水平的表达,说明BD-3基因在乳腺炎病程中起到重要作用,为乳腺炎的机理研究提供借鉴。
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| 关 键 词： | β-防御素-3 克隆 序列分析 差异表达 |
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