| 猪肌生成抑制素C末端80氨基酸编码基因的合成及其原核表达 |
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| 引用本文： | 吕文发,张英霞,欧阳红生,梁冠生,李树伟,张永亮.猪肌生成抑制素C末端80氨基酸编码基因的合成及其原核表达[J].兽医大学学报,2003,23(3):265-267. |
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| 作者姓名： | 吕文发 张英霞 欧阳红生 梁冠生 李树伟 张永亮 |
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| 摘 要： | 将猪肌生成抑制素编码序列下游883-l126bp按大肠杆菌嗜好密码子进行优化，将优化后序列双链分成l2个单链片段(F1、F2、F3、R6、R5、R4、F4、F5、F7、R3、R2、R1)，采用化学合成方法合成，每对相邻互补片段之间有20bp序列交叉重叠。F1长38bp，Rl长36bp，其他片段均40bp长，Fl和R1片段两端分别加上限制性内切酶NcoI和XhoI的识别位点序列。经PCR扩增出254bp片段，该片段与pMDl8—T载体连接，转化JMl09感受态细胞，所得阳性克隆进行测序分析，得到的克隆序列与设计的序列完全一致，表明成功地获得了猪肌生成抑制素下游编码序列克隆载体。从阳性细菌中提取质粒，经NcoI和XhoI酶切，回收254bp目的片段，定向克隆到pET28a中，转化DH5α受体菌，提取质粒，再转化到BL2l(DE3)中，成功筛选出阳性克隆。阳性菌经IPTG诱导，通过SDS—PAGE，检测出猪肌生成抑制素的表达。
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| 关 键 词： | 猪 肌生成抑制素 C末端 氨基酸编码基因 合成 原核表达 |
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