| 应用Gibson Assembly方法构建狂犬病病毒SRV9株重组感染性cDNA克隆 |
| |
| 引用本文： | 王伟,魏玉圆,翟少华,毛丽萍,皮文辉,简子健.应用Gibson Assembly方法构建狂犬病病毒SRV9株重组感染性cDNA克隆[J].动物医学进展,2017,38(11). |
| |
| 作者姓名： | 王伟 魏玉圆 翟少华 毛丽萍 皮文辉 简子健 |
| |
| 作者单位： | 1. 新疆农业大学动物医学学院,新疆乌鲁木齐,830052;2. 新疆生产建设兵团绵羊遗传改良和健康养殖重点实验室,新疆石河子,832000 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目，新疆生产建设兵团应用基础研究项目 |
| |
| 摘 要： | 应用Gibson Assembly连接法精确快速构建狂犬病病毒SRV9株重组感染性cDNA克隆,为狂犬病病毒感染性cDNA克隆的构建提供新的方法。应用Gibson Assembly连接法在同一反应体系内,将多个片段和经限制性内切酶线性化的载体,按设计的顺序进行连接,实现多个片段的一步组装。设计带有20bp~30bp重叠序列的PCR引物,扩增得到带有重叠序列的狂犬病病毒5个结构蛋白基因和增强型荧光蛋白基因。扩增的片段和线性化的载体经胶回收纯化后,与Gibson连接液混合后,50℃反应60min,连接产物转化Stbl3感受态细胞,提取重组质粒,经PCR、酶切和测序鉴定,缺失了病毒伪基因Ψ区和糖蛋白基因的跨膜区并且将增强型荧光蛋白基因插入糖蛋白基因终止密码子前,构建了全长17 600bp的重组质粒,完成了重组全长感染性cDNA克隆的构建。
|
| 关 键 词： | 狂犬病病毒 GibsonAssembly连接法 构建 感染性cDNA克隆 |
Construction of Recombinant Infectious cDNA Clone of SRV9 Rabies Virus by Gibson Assembly |
| |
| WANG Wei,WEI Yu-yuan,ZHAI Shao-hua,MAO Li-ping,PI Wen-hui,JIAN Zi-jian.Construction of Recombinant Infectious cDNA Clone of SRV9 Rabies Virus by Gibson Assembly[J].Progress In Veterinary Medicine,2017,38(11). |
| |
| Authors: | WANG Wei WEI Yu-yuan ZHAI Shao-hua MAO Li-ping PI Wen-hui JIAN Zi-jian |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
