| 日本血吸虫Sj CyclophilinA基因的克隆、表达及其生物学功能研究 |
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| 引用本文： | 彭金彪,韩宏晓,洪炀,王欣之,石耀军,傅志强,刘金明,林矫矫.日本血吸虫Sj CyclophilinA基因的克隆、表达及其生物学功能研究[J].中国农业科学,2010,43(7):1531-1538. |
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| 作者姓名： | 彭金彪 韩宏晓 洪炀 王欣之 石耀军 傅志强 刘金明 林矫矫 |
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| 作者单位： | （中国农业科学院上海兽医研究所/农业部动物寄生虫学重点开放实验室） |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，科技部科研项目，国家高技术研究发展计划(863计划) |
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| 摘 要： | 【目的】克隆和表达了日本血吸虫CyclophilinA(Sj CyPA)编码基因cDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。【方法】从实验室构建的7天童虫消减cDNA文库中,PCR扩增一EST序列的基因全长cDNA,提交到NCBI,登录号为GQ403666。应用荧光实时定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,以pET28a(+)为载体构建重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达。诱导、表达、纯化和复性重组蛋白,测定其PPIase活性。利用Western blot检测重组蛋白的抗原性。以重组抗原免疫小鼠,评估其对小鼠诱导的免疫保护效果。【结果】PCR获得了Sj CyPA编码基因的全长cDNA,其开放阅读框为519bp。荧光实时定量PCR分析表明,该基因在13d童虫表达量最高,为童虫期高表达基因。构建了重组表达质粒pET28a(+)-Sj CyPA,并在大肠杆菌中成功表达。复性重组蛋白具有PPIase活性。Western blot试验显示该重组蛋白具有良好的抗原性,在小鼠免疫试验中,与空白对照组比较,免疫组小鼠获得18.72%的减虫率和44.6%的肝脏减卵率。【结论】获得了日本血吸虫童虫期高表达的Sj CyPA基因的全长cDNA,成功构建了Sj CyPA原核重组表达质粒,在大肠杆菌中成功表达,纯化复性得到有PPIase活性的Sj CyPA重组蛋白,并证实该重组抗原在小鼠体内诱导产生了部分免疫保护效果。
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| 关 键 词： | 日本血吸虫 Cyclophilin A（CyPA） 克隆和表达 PPIase活性 免疫保护效果 |
| 收稿时间： | 2009-08-25; |
Cloning, Expression and Biological Function Analysis of the Novel Gene Sj Cyclophilin A of Schistosoma Japonicum |
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| PENG Jin-biao,HAN Hong-xiao,HONG Yang,WANG Xin-zhi,SHI Yao-jun,FU Zhi-qiang,LIU Jin-ming,LIN Jiao-jiao.Cloning, Expression and Biological Function Analysis of the Novel Gene Sj Cyclophilin A of Schistosoma Japonicum[J].Scientia Agricultura Sinica,2010,43(7):1531-1538. |
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| Authors: | PENG Jin-biao HAN Hong-xiao HONG Yang WANG Xin-zhi SHI Yao-jun FU Zhi-qiang LIU Jin-ming LIN Jiao-jiao |
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| Institution: | PENG Jin-biao,HAN Hong-xiao,HONG Yang,WANG Xin-zhi,SHI Yao-jun,FU Zhi-qiang,LIU Jin-ming,LIN Jiao-jiao (Shanghai Veterinary Research Institute Chinese Academy of Agricultural Science,Key Laboratory of Animal Parasitology,Ministry of Agriculture,Shanghai 200241) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cyclophilin A(CyPA) Schistosoma japonnicum CyclophilinA (Sj CyPA) gene clone and expression PPIasc activity immunoprotcctive effect |
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