| 3种猪细胞因子mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用 |
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| 引用本文： | 王凤雪,黄双,刘莹,杨勇,孙娜,朱洪伟,张淑琴,程世鹏,温永俊.3种猪细胞因子mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用[J].中国畜牧兽医,2015,42(1):24-31. |
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| 作者姓名： | 王凤雪 黄双 刘莹 杨勇 孙娜 朱洪伟 张淑琴 程世鹏 温永俊 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院特产研究所, 特种经济动物分子生物学国家重点实验室, 长春 130112;2. 沈阳农业大学, 沈阳 110866 |
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| 基金项目： | 国家高技术发展计划项目(国家"863"计划项目)(2011AA10A213);吉林省科技发展计划项目(20121823) |
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| 摘 要： | 为建立猪细胞因子SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank中3种重要的猪细胞因子即猪白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、α-干扰素(interferon α,IFN-α)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)的基因序列,设计特异引物扩增目的基因.将3种基因克隆至pMD18-T载体上,得到各自阳性克隆质粒,以3种阳性质粒为标准品建立标准曲线并进行熔解曲线分析以及灵敏性、特异性和重复性试验.结果表明,当标准品稀释度为1×101~1×106 拷贝/μL时,3种基因的Ct值与浓度间具有良好的线性关系,相关系数均≥0.992.熔解曲线分析表明,产物为特异性单峰且重复性较好.应用建立的方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJM-F92株免疫的30日龄猪外周血单核细胞(PBMC)中IL-12、IFN-α和TNF-α表达量进行检测,结果发现,免疫了PRRSV TJM-F92株的猪PBMC细胞内3种细胞因子表达量均极显著升高(P< 0.01).研究结果为IL-12、IFN-α和TNF-α的定量分析提供了技术平台.
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| 关 键 词： | 猪 细胞因子 SYBR Green Ⅰ 实时荧光定量RT-PCR |
| 收稿时间： | 2014-07-02 |
Establishment and Application of Real-time Fluorescent Quantitative RT-PCR Method of the Detection of Three Swine Cytokines |
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| WANG Feng-xue,HUANG Shuang,LIU Ying,YANG Yong,SUN Na,ZHU Hong-wei,ZHANG Shu-qin,CHENG Shi-peng,WEN Yong-jun.Establishment and Application of Real-time Fluorescent Quantitative RT-PCR Method of the Detection of Three Swine Cytokines[J].China Animal Husbandry & Veterinary Medicine,2015,42(1):24-31. |
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| Authors: | WANG Feng-xue HUANG Shuang LIU Ying YANG Yong SUN Na ZHU Hong-wei ZHANG Shu-qin CHENG Shi-peng WEN Yong-jun |
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| Institution: | 1. State Key Laboratory for Molecular Biology of Special Economic Animals, Institute of Special Wild Economic Animals and Plants, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Changchun 130112, China;2. Shenyang Agricultural University, Shenyang 110866, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | swine cytokines SYBR Green Ⅰ Real-time fluorescent quantitative RT-PCR |
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