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茶树类黄酮3’,5’-羟化酶在大肠杆菌的表达和优化
引用本文:陈啸天,高丽萍,赵磊,刘亚军,王云生,夏涛.茶树类黄酮3’,5’-羟化酶在大肠杆菌的表达和优化[J].安徽农业大学学报,2012,39(5):707-713.
作者姓名:陈啸天  高丽萍  赵磊  刘亚军  王云生  夏涛
作者单位:1. 安徽农业大学生命科学学院,合肥,230036
2. 安徽农业大学教育部茶叶生物化学与生物技术重点实验室,合肥,230036
3. 安徽农业大学生命科学学院,合肥230036;安徽农业大学教育部茶叶生物化学与生物技术重点实验室,合肥230036
基金项目:国家自然科学基金(30972401,31170647,31170282和31000314)共同资助
摘    要:儿茶素是茶叶主要特征和功能成分之一,其中B环三羟基儿茶素约占儿茶素总量的65%以上。类黄酮3’,5’-羟化酶是类黄酮合成中B环5’羟基化的唯一酶系,与B环三羟基儿茶素合成积累密切相关。采用RACE技术,克隆了茶树类黄酮3’,5’-羟化酶基因的1 944 bp的全长序列,开放阅读框区域为55~1 587 bp,编码510个氨基酸,推测其分子量为57.1 kDa,等电点为9.06。该基因重组至pET-32a(+)表达载体上,在大肠杆菌Rosetta中进行原核表达;优化了原核表达中温度诱导条件;利用钴离子吸附柱纯化了目的蛋白。该研究为开展F3’5’H酶的反应动力学、酶的器官组织定位等研究奠定了基础。

关 键 词:茶树  类黄酮3’  5’-羟化酶  RACE  原核表达
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