| 致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌外膜蛋白A前体蛋白的克隆表达 |
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| 引用本文： | 张笛,张勇攀,钱文正,于恩琪,秦爱建,金文杰.致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌外膜蛋白A前体蛋白的克隆表达[J].江苏农业科学,2014(8). |
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| 作者姓名： | 张笛 张勇攀 钱文正 于恩琪 秦爱建 金文杰 |
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| 作者单位： | 扬州大学兽医学院/教育部禽类预防医学重点实验室,江苏扬州,225009 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(编号30800822)；江苏省青蓝工程计划；教育部创新团队发展计划；江苏省高校优势学科建设工程。 |
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| 摘 要： | 以致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌分离株G8107菌株基因组DNA为模板,用PCR法扩增ompA precursor基因,PCR产物用EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切,酶切产物回收与相同黏性末端的表达载体pET-32a(+)连接构建表达ompA precursor的重组质粒,将此重组质粒转化入表达宿主菌BL21(DE3),抽提质粒,酶切鉴定及测序正确后诱导表达。对转化菌株以IPTG进行诱导后,裂解细菌,离心,上清进行SDS-PAGE鉴定。测序结果显示,ompA precursor基因大小为1 014 bp,编码338个氨基酸残基,蛋白相对分子质量约为36。原核表达产物经SDS-PAGE分析表明,以28℃1.0 mmol/L的IPTG诱导6 h,该基因表达效果最好。经Western Blot检测,表达的重组蛋白可与抗His标签蛋白单抗反应。
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| 关 键 词： | 致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌 外膜蛋白前体 克隆与表达 |
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