| 牛p53基因真核表达载体构建及其在卵母细胞中表达定位 |
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| 引用本文： | 张亚伟,安鹏,张德锋,刘明兰,雷安民.牛p53基因真核表达载体构建及其在卵母细胞中表达定位[J].农业生物技术学报,2013,21(3). |
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| 作者姓名： | 张亚伟 安鹏 张德锋 刘明兰 雷安民 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学动物医学院,陕西省干细胞工程技术研究中心,陕西省农业分子生物学重点实验室,杨凌712100 |
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| 摘 要： | p53是一种肿瘤抑制基因,在细胞周期阻滞、细胞凋亡、衰老和自噬过程中发挥着调控作用,在机体的各个组织中广泛表达.本研究旨在构建牛p53基因真核表达载体并研究其在牛卵母细胞中的表达和定位.首先从牛(Bos taurus)卵丘细胞中克隆了p53基因并将其连接到pMD 19-T载体上,双酶切鉴定后定向连接到pVenus载体上构建了pVenus-p53真核表达载体,经脂质体2000介导转染Hela细胞,确定重组质粒在Hela细胞中的表达定位,主要定位于细胞核.然后用体外转录试剂盒将p53-Venus转录成cRNA,通过显微注射观察其在卵母细胞中的表达定位情况,主要定位于细胞核,但胞质中也有少量表达.最后,取体外培养不同时期的牛卵母细胞,通过实时定量PCR检测p53在体外培养不同时期的表达量的变化,采用2-ΔΔC法分析p53/β-actin表达水平的变化值,p53的表达从GV期到MⅠ期迅速升高,在MⅠ期其表达量达到最高,随后又逐渐降低.本研究构建了牛p53真核表达载体pVenus-P53,并且体外转录的p53-Venus cRNA能在牛卵母细胞中正确表达定位,检测了p53在牛卵母细胞成熟培养各个时期表达量的变化,为进一步研究p53在牛卵母细胞体外成熟中的作用提供了参考资料.
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| 关 键 词： | p53基因 体外转录 显微注射 牛卵母细胞 |
Construction of Eukaryotic Expression Vector pVenus-p53 and Its Expression and Localization in the Bovine (Bos taurus) Oocyte |
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| ZHANG Ya-Wei
,
AN Peng
,
ZHANG De-Feng
,
LIU Ming-Lan
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LEI An-Min.Construction of Eukaryotic Expression Vector pVenus-p53 and Its Expression and Localization in the Bovine (Bos taurus) Oocyte[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2013,21(3). |
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| Authors: | ZHANG Ya-Wei AN Peng ZHANG De-Feng LIU Ming-Lan LEI An-Min |
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