牛ATG10基因的克隆、原核表达、纯化和生物信息学分析 |
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引用本文: | 贺渊秀,付强,塞力克·杰恩斯,李丹,葛丽娟,史慧君.牛ATG10基因的克隆、原核表达、纯化和生物信息学分析[J].黑龙江畜牧兽医,2023(11):15-20+137. |
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作者姓名: | 贺渊秀 付强 塞力克·杰恩斯 李丹 葛丽娟 史慧君 |
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作者单位: | 新疆农业大学动物医学学院 |
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摘 要: | 为了获得牛自噬相关基因10(ATG10)蛋白,试验参照GenBank中牛ATG10基因设计引物,PCR扩增ATG10基因,与pET-N-His-TEV载体连接,测序鉴定正确后用IPTG诱导ATG10蛋白表达,利用Ni-TED琼脂糖树脂进行蛋白纯化,Western-blot鉴定ATG10蛋白表达情况,通过生物信息学在线软件对ATG10蛋白进行分析,获得其相应的理化性质及参数。结果表明:克隆得到的ATG10基因序列长度约为705 bp,测序鉴定正确后得到pET-N-His-TEV-ATG10原核表达载体,IPTG成功诱导表达了ATG10蛋白,分子量为28 ku; ATG10蛋白与兔抗ATG10抗体特异性结合;ATG10蛋白是一种较为稳定的、含38个潜在的磷酸化位点、无跨膜区及信号肽的亲水性蛋白,二级结构中无规则卷曲占比44.44%,与ATG5、ATG12、ATG16L1、ATG3等多个自噬相关蛋白相互作用。说明试验成功构建出pET-N-His-TEV-ATG10原核表达载体,并获得ATG10蛋白。
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关 键 词: | 自噬相关基因10(ATG10) 基因克隆 原核表达 纯化 生物信息学分析 |
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