| 弓形虫天冬氨酸蛋白酶2(TgASP2)的生物信息学分析及多克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 孙晓敬,田甜,马茜,张磊,李薇,姚佳,汪洋.弓形虫天冬氨酸蛋白酶2(TgASP2)的生物信息学分析及多克隆抗体的制备[J].黑龙江畜牧兽医,2023(15):18-24+129-130. |
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| 作者姓名： | 孙晓敬 田甜 马茜 张磊 李薇 姚佳 汪洋 |
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| 作者单位： | 西安医学院基础医学部病原生物学教研室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目(32070069)；;陕西省自然科学基金面上项目(2021JM-506)； |
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| 摘 要： | 为了预测分析弓形虫天冬氨酸蛋白酶2(TgASP2)的生物结构及功能，并制备多克隆抗体，试验首先采用生物信息学软件对TgASP2蛋白的理化性质、二级结构、三级结构、信号肽、跨膜结构域、磷酸化位点及B、T淋巴细胞抗原表位等进行分析，然后构建原核表达载体，采用Ni-NTA柱亲和层析法纯化重组蛋白，再免疫大鼠制备特异性多克隆抗体。结果表明：TgASP2蛋白的分子式为C2296H3588N626O661S24,等电点为7.22,为亲水性稳定蛋白；N端第1～19位氨基酸为信号肽序列，无跨膜结构域，共有37个磷酸化位点；具有14个B淋巴细胞线性表位、4个CTL细胞抗原表位及3个Th细胞抗原表位。试验成功构建出重组质粒pET-28a(+)-TgASP2,获得了可溶性重组蛋白rTgASP2;成功制备出多克隆抗体，且制备的多克隆抗体能特异性识别弓形虫内源性TgASP2蛋白，抗体效价高达1∶128 000。说明TgASP2蛋白具有一定的免疫原性，能引发良好的免疫应答。
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| 关 键 词： | 弓形虫 天冬氨酸蛋白酶2 生物信息学分析 表达载体 表位预测 多克隆抗体 |
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