| 猪伪狂犬病病毒经典毒株与变异毒株双重实时荧光定量PCR方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 苏金辉,邓云贵,夏冰.猪伪狂犬病病毒经典毒株与变异毒株双重实时荧光定量PCR方法的建立及应用[J].黑龙江畜牧兽医,2023(21):84-89. |
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| 作者姓名： | 苏金辉 邓云贵 夏冰 |
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| 作者单位： | 1. 北京大北农科技集团股份有限公司;2. 河北大北农农牧食品有限公司;3. 中国中医科学院中药研究所 |
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| 摘 要： | 为了建立一种快速检测猪伪狂犬病病毒(PRV)经典毒株和变异毒株的双重实时荧光定量PCR方法，试验根据GenBank上收录的30株PRV设计gE基因和gC基因的特异性引物和探针，构建含有gE基因和gC基因的标准质粒，优化扩增体系建立双重实时荧光定量PCR方法，并检验该方法的特异性、敏感性和重复性，同时绘制标准曲线，最后采用该方法对临床样品进行检测。结果表明：试验建立的双重实时荧光定量PCR方法的最佳退火温度是60℃,最佳引物体积为0.8μL,最佳探针体积为0.4μL。该方法对猪场常见疫病病原猪蓝耳病病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪圆环病毒3型(PCV-3)、猪细小病毒(PPV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)均无交叉反应，特异性强；对两种标准质粒pUC57-gE和pUC57-gC的最低检测限均为1×101copies/μL,gE基因和gC基因对应的标准曲线分别为y=-3.446x+41.920(R2=0.998)和y=-3.255x+39.185(R2...
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| 关 键 词： | 伪狂犬病病毒 变异毒株 鉴别诊断 特异性 敏感性 |
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