| 核盘菌转录因子SsMCM1原核表达与亚细胞定位 |
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| 引用本文： | 王雪亮,刘言志,吕兴明,张艳华,张祥辉,刘金亮,潘洪玉,张鑫生.核盘菌转录因子SsMCM1原核表达与亚细胞定位[J].植物病理学报,2019,49(1):35-42. |
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| 作者姓名： | 王雪亮 刘言志 吕兴明 张艳华 张祥辉 刘金亮 潘洪玉 张鑫生 |
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| 作者单位： | 吉林大学植物科学学院,长春 130062;
长春市绿化管理处,长春 130062 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31101394;31772108) |
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| 摘 要： | 核盘菌是一类寄主范围广泛的植物病原真菌。MADS-box蛋白家族基因广泛存在于生物体中,参与调控细胞识别、新陈代谢、细胞周期等。核盘菌转录因子SsMCM1调控其子实体形成与致病性。为进一步揭示SsMCM1的作用机制,本研究以核盘菌野生型菌株uf-70的cDNA为模板,扩增得到SsMCM1基因,并与原核表达载体pET-28a(+)连接,构建成重组质粒转化到大肠杆菌BL21(pLysS)表达菌株中,通过IPTG的诱导和亲和层析,纯化得到SsMCM1蛋白,并以此为抗原获得抗血清,完成效价测定。利用特异性抗血清,与核盘菌不同组织蛋白进行特异性的免疫结合,发现其与核盘菌总蛋白、核盘菌细胞质总蛋白均特异性结合,而核盘菌细胞壁蛋白未发现特异性反应,表明SsMCM1不定位于核盘菌细胞壁上。此外,构建其亚细胞定位载体pCG-1301::SsMCM1,并将重组质粒转化到农杆菌中,通过农杆菌的侵染作用进行瞬时表达,发现SsMCM1定位于细胞核中,作为转录因子调控核盘菌的子实体发育与致病性。
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| 关 键 词： | 核盘菌 转录因子 SsMCM1 原核表达 亚细胞定位 |
| 收稿时间： | 2018-03-20 |
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