| 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 乌吉斯古楞,刘亭岐,巨敏莹,张斌,韩宇,刘建奇,宋庆庆,关平原.猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的原核表达及多克隆抗体制备[J].中国动物检疫,2020,37(10):121-126. |
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| 作者姓名： | 乌吉斯古楞 刘亭岐 巨敏莹 张斌 韩宇 刘建奇 宋庆庆 关平原 |
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| 摘 要： | 为体外表达猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）糖基化囊膜蛋白GP5，以及制备其多克隆抗体，以PRRSV PC疫苗株RNA为模板，应用RT-PCR扩增GP5基因，并克隆至原核表达载体pET-32a（+），构建重组表达载体pET-32a-GP5。经过酶切和测序鉴定后，将阳性重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中，加入IPTG低温诱导表达。使用亲和层析法纯化PRRSV GP5蛋白。然后将纯化的蛋白免疫北京大耳白兔制备多克隆抗体，并进行酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接免疫荧光分析（IFA）。结果显示，表达的PRRSV GP5原核蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在，相对分子质量大约30 kDa；制备的GP5蛋白多克隆抗体ELISA效价可达1:64 000；IFA检测显示，制备的多克隆抗体能够识别PRRSV。重组PRRSV GP5蛋白及其多克隆抗体的成功制备为PRRSV血清学检测方法的建立提供了良好的生物学材料。
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| 关 键 词： | 猪繁殖与呼吸综合征病毒 糖基化囊膜蛋白GP5 原核表达 多克隆抗体 |
Prokaryotic Expression of GP5 Protein of PRRSV and Preparation of Its Polyclonal Antibody |
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| Wujisiguleng,Liu Tingqi,Ju Minying,Zhang Bin,Han Yu,Liu Jianqi,Song Qingqing,Guan Pingyuan.Prokaryotic Expression of GP5 Protein of PRRSV and Preparation of Its Polyclonal Antibody[J].China Journal Of Animal Quarantine,2020,37(10):121-126. |
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| Authors: | Wujisiguleng Liu Tingqi Ju Minying Zhang Bin Han Yu Liu Jianqi Song Qingqing Guan Pingyuan |
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