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虾夷马粪海胆溶菌酶基因全长cDNA的克隆与表达分析
引用本文:姬南京,杨芸菲,丁君,常亚青.虾夷马粪海胆溶菌酶基因全长cDNA的克隆与表达分析[J].中国水产科学,2013,20(5):950-957.
作者姓名:姬南京  杨芸菲  丁君  常亚青
作者单位:大连海洋大学 农业部北方海水增养殖重点实验室, 辽宁 大连 116023
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30972269); 国家863计划项目(2012AA10A412); 辽宁省科技计划项目(2007203004).
摘    要:

本实验采用RT-PCRcDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆得到了虾夷马粪海胆(Strongylocentrotus intermedius)溶菌酶(LYZ)基因的全长cDNA序列。结果表明, 虾夷马粪海胆LYZ基因全长为912 bp, 含有1480 bp的开放阅读框(ORF), 编码159个氨基酸, 其中第1−20个氨基酸为信号肽, 蛋白计算分子量为17.69 kD, 等电点为7.75。氨基酸比对分析表明, 虾夷马粪海胆LYZ基因与紫球海胆(Strongylocentrotus purpuratus)和刺参(Apostichopus japonicus)iLYZ基因相似百分比分别为91.4%59.3%, 并且含有iLYZ基因的保守序列DVGSLSCGP (Y)Y(F)QIK, 所以推断本实验克隆的溶菌酶为i型。采用实时定量PCR方法, β-actin为内标, 对其在虾夷马粪海胆各组织中的表达进行研究, 发现LYZ基因在围口膜中表达量最高, 其次是齿间肌、管足、肠、体腔液、雄性性腺和雌性性腺。利用脂多糖(LPS)刺激虾夷马粪海胆, 取刺激后不同时间的海胆体腔液, 对该基因的表达差异进行分析。结果表明, 虾夷马粪海胆的LYZ基因在LPS刺激后8 h时表达量最高, 12 h时开始逐步回落, 36 h时回落至对照组相近水平。本结果可为虾夷马粪海胆免疫学研究及抗病相关分子标记的开发提供参考依据。



关 键 词:虾夷马粪海胆    溶菌酶    基因表达    脂多糖(LPS)
修稿时间:2013/9/26 0:00:00

Cloning and expression analysis of a sea urchin(Strongylocentrotus intermedius) lysozyme gene
JI Nanjing,YANG Yunfei,DING Jun,CHANG Yaqing.Cloning and expression analysis of a sea urchin(Strongylocentrotus intermedius) lysozyme gene[J].Journal of Fishery Sciences of China,2013,20(5):950-957.
Authors:JI Nanjing  YANG Yunfei  DING Jun  CHANG Yaqing
Institution:Dalian Ocean University, Key Laboratory of Mariculture & Stock Enhancement in North China Sea, Ministry of Agriculture, Dalian 116023, China
Abstract:
Keywords:Strongylocentrotus intermedius  lysozyme  gene expression  lipopolysaccharide(LPS)
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