| 表达Strep-tag的重组H5N6亚型禽流感病毒反向遗传操作系统的建立 |
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| 引用本文： | 周圆一,王正祥,汪亮,徐帅,曾巧英.表达Strep-tag的重组H5N6亚型禽流感病毒反向遗传操作系统的建立[J].中国动物传染病学报,2018(2). |
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| 作者姓名： | 周圆一 王正祥 汪亮 徐帅 曾巧英 |
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| 作者单位： | 甘肃农业大学;中国农业科学院兰州兽医研究所 |
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| 摘 要： | 为构建携带Strep标签的禽流感病毒(Avian infl uenza virus,AIV)A/Goose/Hunan/109/2014(H5N6,HN109)反向遗传操作系统,RT-PCR扩增AIV HN109株8个基因片段,分别连接至p BD双向转录表达载体。通过点突变技术将NS1基因的77~84位的氨基酸替换成Strep-tag。将8个重组质粒共转染293T细胞,48 h后收取细胞上清接种至9~11日龄SPF鸡胚,并检测血凝效价。结果显示,本研究成功拯救病毒株r HN109-NS1-Strep。r HN109-NS1-Strep的8个基因片段序列与亲本毒素HN109株一致;r HN109-NS1-Strep与亲本毒HN109株在MDCK细胞上复制水平相似,在小鼠体内病毒复制能力相似。结果表明,本研究已成功构建携带Strep-tag的H5N6亚型禽流感病毒反向遗传操作系统,为研究该病毒的分子致病机理、传播机制及新型疫苗的研制奠定了基础。
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