| PRRSV N与GP5蛋白抗原表位的串联表达及其间接ELISA检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 陈如敬,周伦江,吴学敏,等.PRRSV N与GP5蛋白抗原表位的串联表达及其间接ELISA检测方法的建立[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2017,45(10):15-20. |
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| 作者姓名： | 陈如敬 周伦江 吴学敏 等 |
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| 作者单位： | 福建省农业科学院 畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福建省农业科学院 畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福建省农业科学院 畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心 |
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| 基金项目： | 福建省属公益类项目（2014R1023-16；2014R1023-13）；福建省畜禽疫病防控技术重大研发平台项目（2014N2003） |
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| 摘 要： | 【目的】建立基于N与GP5蛋白抗原表位串联的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗体ELISA检测方法,为开发准确、廉价的PRRSV抗体检测试剂盒奠定基础。【方法】将PRRSV的N蛋白和GP5蛋白抗原表位串联优化后进行原核表达,以表达的目的蛋白为抗原,通过优化反应条件建立检测PRRSV抗体的ELISA方法,对其特异性、重复性进行检测。用建立的间接ELISA方法和商品化IDEXX试剂盒同时对临床送检的45份猪血清样品进行检测,计算其符合率。【结果】SDS-PAGE和Western Blot分析表明,表达的目的蛋白分子质量约为24.7ku,具有良好的生物学活性,且为可溶性表达。目的蛋白经纯化后作为抗原包被ELISA平板,建立检测PRRSV抗体的间接ELISA方法,优化后的ELISA条件为:抗原(纯化后的目的蛋白)包被量为5μg/mL、一抗(猪血清)1∶80稀释、酶标二抗1∶5 000稀释,以含50g/L脱脂奶粉的PBST作为封闭液,37℃孵育60min,抗体(一抗和酶标二抗)于37℃孵育90min,TMB避光显色8min;间接ELISA的判定标准为:OD450≥0.345 2为阳性,OD4500.345 2为阴性。所建立的间接ELISA方法特异性强,对猪常见病原,如猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒和猪流行性乙型脑炎病毒高免血清检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为1.02%~3.94%和1.38%~4.83%。用所建立的间接ELISA方法对临床送检45份猪血清样品的检测阳性率为84.44%(38/45),商品化IDEXX试剂盒检测的阳性率为80%(36/45),2种方法的符合率为94.73%(36/38)。【结论】成功建立了基于N与GP5蛋白抗原表位串联的PRRSV抗体ELISA检测方法。
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| 关 键 词： | 猪繁殖与呼吸综合征病毒 N蛋白 GP5蛋白 抗原表位 串联表达 间接ELISA |
| 收稿时间： | 2016/8/16 0:00:00 |
Establishment of an indirect enzyme-linked immuno sorbent assay for detecting PRRSV serum antibody based on tandem expression with antigen epitopes of GP5 and N proteins |
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| CHEN Rujing,ZHOU Lunjiang and WU Xuemin,et al.Establishment of an indirect enzyme-linked immuno sorbent assay for detecting PRRSV serum antibody based on tandem expression with antigen epitopes of GP5 and N proteins[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2017,45(10):15-20. |
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| Authors: | CHEN Rujing ZHOU Lunjiang and WU Xuemin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | porcine reproductive and respiratory syndrome virus N proteins GP5 proteins antigen epitopes tandem expression indirect ELISA |
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