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| 猪NLRP3蛋白的原核表达与多克隆抗体制备 | |
| 作者单位： | ;1.海南省农业科学院畜牧兽医研究所;2.海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室;3.海南省院士工作站(畜牧兽医);4.山东省滨州畜牧兽医研究院 |
| 摘 要： | 为了获得猪源NLRP3重组蛋白以及针对猪NLRP3蛋白的多克隆抗体,本试验采用原核表达技术对猪源NLRP3蛋白的主要抗原区域进行了截短表达与鉴定,并以重组蛋白为免疫原免疫兔制备兔抗NLRP3蛋白多克隆抗体。结果显示,经RT-PCR方法扩增到大小为864 bp的NLRP3蛋白的主要抗原区域基因;将目的片段定向克隆至pET-32α原核表达载体,转化大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导获得了大小为50 000的重组蛋白;重组蛋白经纯化后Western blot检测其可与抗His标签单克隆抗体发生特异性反应;以纯化蛋白为免疫原制备的兔抗NLRP3蛋白多克隆抗体的抗体效价达1∶25 600,Western blot检测其可与NLRP3重组蛋白发生特异性反应。结果表明,获得了具有良好反应活性的NLRP3重组蛋白与多克隆抗体,为研究NLRP3蛋白的结构与功能、NLRP3蛋白与猪炎症性疾病的相互作用机制奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 猪 NLRP3蛋白 原核表达 多克隆抗体 |
Prokaryotic expression of porcine NLRP3 protein and preparation of polyclonal antibody |
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