| 水牛KDM4D基因克隆分析及其真核表达载体的构建 |
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| 引用本文： | 俸云,赵鑫,许洁,余庆,沈朋雷,王露露,吴飞,石德顺,陆凤花.水牛KDM4D基因克隆分析及其真核表达载体的构建[J].中国兽医学报,2019(10):2067-2074. |
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| 作者姓名： | 俸云 赵鑫 许洁 余庆 沈朋雷 王露露 吴飞 石德顺 陆凤花 |
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| 作者单位： | 1.广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划“863”资助项目(2011AA100607);国家自然科学基金资助项目(31560633,31760666) |
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| 摘 要： | 旨在克隆水牛组蛋白去甲基化酶KDM4D (lysine K-specific demethylase 4D)基因,对其进行生物信息学分析,并构建KDM4D基因的真核表达载体,为研究KDM4D基因在水牛体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)胚胎发育中的作用奠定基础。试验从水牛睾丸组织中提取总RNA,反转录cDNA后, RT-PCR技术克隆KDM4D基因片段,并运用生物信息学软件对序列进行分析;随后将KDM4D基因片段连接至真核表达载体pEGFP-C1,再把重组质粒转染进HEK293T细胞。结果表明,克隆所得的水牛KDM4D基因片段编码区全长1 155 bp,共编码384个氨基酸。水牛KDM4D基因与黄牛、山羊、绵羊、犬、猫、猪、人、小鼠、大鼠的同源性分别为98.4%,96.6%,96.3%,84.9%,84.1%,81.4%,80.4%,77.4%,77.3%。多重比较和进化树分析结果显示,KDM4D基因在不同物种及生物进化中具有较高的保守性。蛋白结构域分析显示,克隆所得的KDM4D蛋白结构特殊,只具有1个JmjN (Jumonji N)和1个JmjC (jumonji C)结构域,与KDM4家族其他成员相比缺少PHD (plant homeodomain)和Tud (tudor)功能域。KDM4D蛋白质三级结构预测结果显示,水牛、黄牛和人3种物种间具有较高的相似性。转染结果显示,构建的重组质粒可以在HEK293T细胞中表达。本试验成功克隆水牛KDM4D基因,对其进行生物信息学分析,构建了真核表达载体pEGFP-C1-KDM4D,并在HEK293T细胞中成功表达。
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| 关 键 词： | 水牛 KDM4D基因 基因克隆 生物信息学分析 载体构建 |
Cloning,analysis and construction of eukaryotic expression vector of buffalo KDM4D gene |
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| FENG Yun,ZHAO Xin,XU Jie,YU Qing,SHEN Peng-lei,WANG Lu-lu,WU Fei,SHI De-shun,LU Feng-hua.Cloning,analysis and construction of eukaryotic expression vector of buffalo KDM4D gene[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2019(10):2067-2074. |
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| Authors: | FENG Yun ZHAO Xin XU Jie YU Qing SHEN Peng-lei WANG Lu-lu WU Fei SHI De-shun LU Feng-hua |
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| Institution: | (State Key Laboratory of Conservation and Utilization of Subtropical Agrobioresources ,Guangxi University ,Nanning 530004 ,China) |
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| Abstract: | FENG Yun;ZHAO Xin;XU Jie;YU Qing;SHEN Peng-lei;WANG Lu-lu;WU Fei;SHI De-shun;LU Feng-hua(State Key Laboratory of Conservation and Utilization of Subtropical Agrobioresources ,Guangxi University ,Nanning 530004 ,China) |
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| Keywords: | buffalo KDM4D gene gene cloning bioinformatics analysis vector construction |
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