猪流行性腹泻病毒和猪圆环病毒3型二重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立 |
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引用本文: | 韩昊莹,郑兰兰,田润博,赵宇,张鸿鑫,徐朋丽,陈红英.猪流行性腹泻病毒和猪圆环病毒3型二重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立[J].中国兽医学报,2019(4):615-621. |
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作者姓名: | 韩昊莹 郑兰兰 田润博 赵宇 张鸿鑫 徐朋丽 陈红英 |
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作者单位: | 1.河南农业大学牧医工程学院;2.郑州市猪重大疫病防控重点实验室 |
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基金项目: | 河南省产学研合作计划资助项目(152107000003) |
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摘 要: | 为建立同时快速检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪圆环病毒3型(PCV3)的二重PCR方法,本研究根据GenBank中登录的PEDV M基因和PCV3 Rep基因高度同源保守序列设计并合成2对特异性引物,分别扩增PEDV M基因与PCV3 Rep基因,经过反应条件优化,建立了检测PEDV与PCV3的二重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。结果显示:该方法对PEDV和PCV3的检测结果为阳性,而对猪圆环病毒2型、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒等8种常见的病原体均未检测到荧光信号;且具有良好的线性关系,R^2为0.99;应用本方法对PEDV和PCV3的最低检出量分别为37.6拷贝/μL和61.2拷贝/μL;组内和组间变异系数均小于2%。结果表明:本试验建立的PEDV和PCV3二重实时荧光定量PCR方法具有良好的特异性、敏感性、重复性,为快速、高效、定量检测PEDV和PCV3提供了技术帮助。
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关 键 词: | 猪流行性腹泻病毒 猪圆环病毒3型 荧光定量PCR |
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