| 猪热休克蛋白40(Hsp40)的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 吕其壮,刘畅,颜秋,陈艳,章烨雯,陈旭健,邓旭.猪热休克蛋白40(Hsp40)的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备[J].中国兽医学报,2019(4):728-734. |
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| 作者姓名： | 吕其壮 刘畅 颜秋 陈艳 章烨雯 陈旭健 邓旭 |
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| 作者单位： | 1.广西玉林师范学院生物与制药学院;2.广西农产资源化学与生物技术重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(31860708);广西自然科学基金资助项目(2017GXNSFBA198025);广西高校中青年教师基础能力提升资助项目(2017KY0548);玉林师范学院高层次人才科研启动基金资助项目(G20160005) |
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| 摘 要： | 克隆猪热休克蛋白40 (heat shock protein 40,Hsp40)基因并构建其原核表达载体,以纯化的猪Hsp40蛋白为抗原免疫兔制备抗猪Hsp40多克隆抗体。参照GenBank收录的猪Hsp40全基因序列,设计1对特异性扩增其CDS区全序列的引物,利用RT-PCR方法扩增猪Hsp40基因;扩增产物经双酶切后定向克隆至原核表达载体pCzn1-His,测序无误后转化Arctic Express (DE3) RP感受态高效表达宿主菌,优化其表达条件(时间、IPTG浓度、温度)后,将可溶性的猪Hsp40重组蛋白用His-Band Ni^+层析柱进行纯化,用纯化的His-Hsp40重组蛋白免疫兔以制备多克隆抗体。采用抗原亲和纯化法对制备的多抗进行纯化,并采用间接ELISA法检测抗体效价。利用Western blot检测重组蛋白的免疫原性和反应原性,以及抗体的特异性。结果显示,克隆得到的猪Hsp40基因片段长度为1 485 bp,表达出的可溶性His-Hsp40重组蛋白相对分子质量约为57 800,制备出的猪Hsp40蛋白多克隆抗体效价为1∶512 000,且该多抗能够特异性识别His-Hsp40重组蛋白和猪肺泡巨噬细胞中的Hsp40蛋白。结果表明,成功克隆了猪Hsp40基因,表达并纯化了猪Hsp40蛋白,制备的兔抗猪Hsp40蛋白多克隆抗体能够有效地应用于猪Hsp40蛋白抗原的检测。
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| 关 键 词： | 猪Hsp40蛋白 原核表达与纯化 多克隆抗体 猪圆环病毒2型 |
Prokaryotic expression and purification of porcine heat shock protein 40 (Hsp40)and preparation of its polyclonal antibody |
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| LYU Qi-zhuang,LIU Chang,YAN Qiu,CHEN Yan,ZHANG Ye-wen,CHEN Xu-jian,DENG Xu.Prokaryotic expression and purification of porcine heat shock protein 40 (Hsp40)and preparation of its polyclonal antibody[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2019(4):728-734. |
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| Authors: | LYU Qi-zhuang LIU Chang YAN Qiu CHEN Yan ZHANG Ye-wen CHEN Xu-jian DENG Xu |
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| Institution: | (College of Biology & Pharmacy , Yulin Normal University , Yulin , Guangxi 537000,China;Guangxi Key Laboratory of Agricultural Resources Chemistry and Biotechnology , Yulin,Guangxi 537000 ,China) |
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| Abstract: | LYU Qi-zhuang;LIU Chang;YAN Qiu;CHEN Yan;ZHANG Ye-wen;CHEN Xu-jian;DENG Xu(College of Biology & Pharmacy , Yulin Normal University , Yulin , Guangxi 537000,China;Guangxi Key Laboratory of Agricultural Resources Chemistry and Biotechnology , Yulin,Guangxi 537000 ,China) |
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| Keywords: | porcine heat shock protein 40 ( Hsp40) prokaryotic expression and purification polyclonal antibody porcine circovirus type 2 |
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