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| 重叠延伸PCR法体外重建鸡主要组织相容性复合体Ⅰ | |
| 引用本文： | 李新生,闫若潜,高风山,方勤美,郝惠芳,李云岗,陈红英,夏春.重叠延伸PCR法体外重建鸡主要组织相容性复合体Ⅰ[J].畜牧兽医学报,2006,37(10):1047-1052. |
| 作者姓名： | 李新生 闫若潜 高风山 方勤美 郝惠芳 李云岗 陈红英 夏春 |
| 作者单位： | 1. 中国农业大学动物医学院农业部预防兽医学重点实验室,北京,100094;河南农业大学牧医工程学院,郑州,450002 2. 河南省兽医防治站,郑州,450002 3. 中国农业大学动物医学院农业部预防兽医学重点实验室,北京,100094 4. 河南农业大学牧医工程学院,郑州,450002 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（30371098） |
| 摘 要： | 本研究旨在体外重建鸡主要组织相容性复合体Ⅰ类分子（MHCⅠ）重链（α链）胞外区与轻链（β2m）成熟肽的重组嵌合分子。采用RT—PCR法分别扩增鸡MHCⅠ的重链胞外区和轻链的成熟肽序列；采用重叠延伸PCR（Splicing overlap extension PCR method，SOE-PCR）把通过45个碱基的链连接的鸡MHCⅠ重链胞外区基因和轻链成熟肽基因重组到可溶性表达质粒pMAL-p2X进行可溶性表达。经琼脂糖凝胶电泳证明RT—PCR可分别扩增出鸡MHCⅠα链胞外区基因和β2m成熟肽基因，大小符合预期。采用MHCⅠα链胞外区序列的反义引物与β2m成熟肽基因正义引物有15个碱基重叠的两对引物，以MHCⅠα链胞外区序列与β2m成熟肽序列PCR产物的混合物作为模板，进行重叠延伸获得了预期大小的连接片段；测序显示重组质粒上MHCⅠα链胞外区序列与轻链β2m成熟肽基因的靶序列由一柔性的linker相连，阅读框正确且无移码。本研究表明SOE-PCR是体外重构鸡MHCⅠ的一种简捷可行方法。 |
| 关 键 词： | 鸡 主要组织相容性复合体Ⅰ（MHCⅠ） 重链 轻链 重叠延伸PCR |
| 文章编号： | 0366-6964（2006）10-1047-06 |
| 收稿时间： | 2005-11-21 |
| 修稿时间： | 2005-11-21 |
Reconstruct Chicken Major Histocompatibility Complex Ⅰ in vitro Using Splicing Overlap Extension PCR Method |
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| LI Xin-sheng,YAN Ruo-qian,GAO Feng-shan,FANG Qin-mei,HAO Hui-fang,LI Yun-gang,CHEN Hong-ying,XIA Chun.Reconstruct Chicken Major Histocompatibility Complex Ⅰ in vitro Using Splicing Overlap Extension PCR Method[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2006,37(10):1047-1052. | |
| Authors: | LI Xin-sheng YAN Ruo-qian GAO Feng-shan FANG Qin-mei HAO Hui-fang LI Yun-gang CHEN Hong-ying XIA Chun |
| Institution: | 1. The Key Laboratory for Preventive Veterinary Medicine of Ministry of Agriculture, College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100094 ,China ; 2. College of Husbandry and Veterinary, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China ; 3. Henan Province Veterinary Preventive and Treatment Station, Zhengzhou 450002, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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