| 基于定量PCR技术的AcNPV-CarE病毒液滴度测定及酯酶表达条件优化 |
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| 引用本文： | 李永强,袁国瑞,安凤秋,苏立德,冯俊涛,张 兴.基于定量PCR技术的AcNPV-CarE病毒液滴度测定及酯酶表达条件优化[J].西南农业大学学报,2012,34(10):041-027. |
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| 作者姓名： | 李永强 袁国瑞 安凤秋 苏立德 冯俊涛 张 兴 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学无公害农药研究服务中心/陕西省生物农药工程技术研究中心;西南大学植物保护学院 |
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| 基金项目： | 国家公益性行业(农业)科研专项基金资助项目(200903052) |
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| 摘 要： | 为了制备具有生物学功能的棉铃虫羧酸酯酶(CarEs)体外表达产物,用于研究其对有机磷等化学杀虫剂的代谢解毒作用,该文尝试将棉铃虫羧酸酯酶基因在草地夜蛾细胞系Sf9和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)为载体的表达系统中进行表达,采用实时荧光定量PCR技术测定棉铃虫羧酸酯酶基因和病毒载体重组体(AcNPV-CarE)的病毒液滴度,并通过不同转染系数(MOI)和不同收获时间下培养液中细胞体积单位变化趋势,以及表达产物的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和α-乙酸萘酯染色结果,优化了棉铃虫羧酸酯酶在Sf9细胞中的最佳表达条件.结果表明:重组病毒液P1stock在Sf9细胞中扩大培养至第三代以后的病毒液(P3和P4stock)滴度均在2×108 pfu/mL以上;采用P4stock重组病毒液,在MOI为2,Sf9细胞体积单位为3×106个/mL,转染后48h收获细胞沉淀,可得到具有酶活的最大量羧酸酯酶表达产物.上述结果为棉铃虫羧酸酯酶的异源真核表达和具有天然酶活表达产物的制备提供了有价值的参考.
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| 关 键 词： | 酯酶 杆状病毒 病毒液滴度 转染条件 表达 |
Determination of the Titres of AcNPV-CarE with Quantitative PCR and Optimization of the Conditions for Esterase Expression in vitro |
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| LI Yong-qiang,YUAN Guo-rui,AN Feng-qiu,Su Li-de,FENG Jun-tao,ZHANG Xing.Determination of the Titres of AcNPV-CarE with Quantitative PCR and Optimization of the Conditions for Esterase Expression in vitro[J].Journal of Southwest Agricultural University,2012,34(10):041-027. |
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| Authors: | LI Yong-qiang YUAN Guo-rui AN Feng-qiu Su Li-de FENG Jun-tao ZHANG Xing |
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| Institution: | 1.Research and Development Center of Biorational Pesticides,Shaanxi Technology and Engineering Research Center of Biopesticides,Northwest A&F University,Yangling Shaanxi 712100,China;2.School of Plant Protection,Southwest University,Chongqing 400716,China |
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