| 基于toxR基因的SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测病原副溶血弧菌方法的建立 |
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| 引用本文： | 张晓君,梁利国,阎斌伦,毕可然,秦国民.基于toxR基因的SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测病原副溶血弧菌方法的建立[J].中国兽医学报,2012,32(4):543-547. |
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| 作者姓名： | 张晓君 梁利国 阎斌伦 毕可然 秦国民 |
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| 作者单位： | 淮海工学院海洋学院江苏省海洋生物技术重点建设实验室,江苏连云港,222005 |
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| 基金项目： | 江苏省水产三项工程资助项目(PJ2010-58);江苏省自然科学基金资助项目(BK2009163);连云港市科技攻关基金项目(CG1134) |
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| 摘 要： | 基于副溶血弧菌toxR基因保守序列设计1对特异性引物,建立了SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测副溶血弧菌的方法。常规PCR检测,副溶血弧菌扩增出大小为368bp的目的片段,其他4种病原细菌均为阴性;SYBRGreenⅠ实时定量PCR扩增曲线反映了PCR的指数增长阶段和平台阶段;在Tm为85℃,扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体;所制作的标准曲线在2.7×108～2.7×102拷贝数之间有较好的线性关系,相关系数为0.998,能对副溶血弧菌进行准确的定量分析;该方法检测时间从核酸抽提到结果分析仅需4～5h,较传统方法敏感、操作简单,耗时短,是副溶血弧菌引起的水产动物疾病的快速诊断及食品中针对副溶血弧菌安全检测的有效手段。
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| 关 键 词： | 副溶血弧菌 toxR基因 SYBR GreenⅠ real-time PCR |
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