| 口蹄疫病毒通用型和A型二重实时荧光RT-PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 谢彩华,班付国,闫若潜,王东方,张 煜,刘梅芬,赵雪丽,马震原,王华俊,王淑娟.口蹄疫病毒通用型和A型二重实时荧光RT-PCR检测方法的建立[J].中国动物检疫,2018,35(12):70-74. |
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| 作者姓名： | 谢彩华 班付国 闫若潜 王东方 张 煜 刘梅芬 赵雪丽 马震原 王华俊 王淑娟 |
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| 基金项目： | 河南省科技创新人才计划项目（174200510003） |
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| 摘 要： | 为建立一种快速、敏感、特异的口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)分型鉴别诊断实时荧光RT-PCR(Fluorescence quantitative,FQ-PCR)检测方法,根据O、A、AsiaⅠ三种血清型FMDV保守基因序列,设计能够检测到FMDV的特异性通用检测引物和A型检测引物,以及不同荧光素标记的MGB探针。通过对PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了FMDV通用型和A型二重实时荧光RT-PCR检测方法,并对该方法进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法,对123份疑似FMDV感染的临床样品进行了检测。结果显示,建立的FMDV通用型、A型二重实时荧光RT-PCR检测方法在10~1～10~7拷贝/μL模板范围内有很好的线性关系;对pGEM-T/FMDV-T和pGEM-T/FMDV-A重组质粒出现阳性扩增信号,但对正常细胞培养物对照和其他7种病原对照未扩增出特异性曲线;自123份疑似FMDV感染样品中,检出10份FMDV-T阳性,6份FMDV-T/FMDV-A双阳性并且与基因测序结果一致。结果表明,本研究建立的FMDV通用型、A型二重实时荧光RT-PCR检测方法重复性好、敏感性高、特异性强,最低检测模板浓度为10拷贝/μL,可用于FMDV的快速分型检测,为FMDV的早期检测及临床诊断提供了新方法。
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| 关 键 词： | 口蹄疫病毒 二重实时荧光RT-PCR 检测方法 |
Establishment of a Duplex Real-time RT-PCR Assay for Detection of Universal and Serotype A FMDV |
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| Xie Caihu,Ban Fuguo,Yan Ruoqian,Wang Dongfang,Zhang Yu,Liu Meifen,Zhao Xueli,Ma Zhenyuan,Wang Huajun,Wang Shujuan.Establishment of a Duplex Real-time RT-PCR Assay for Detection of Universal and Serotype A FMDV[J].China Journal Of Animal Quarantine,2018,35(12):70-74. |
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| Authors: | Xie Caihu Ban Fuguo Yan Ruoqian Wang Dongfang Zhang Yu Liu Meifen Zhao Xueli Ma Zhenyuan Wang Huajun Wang Shujuan |
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