| 日本鳗鲡肠道蛋白酶的分离纯化及其酶学性质研究 |
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| 引用本文： | 林建城,王国玲,闵志勇.日本鳗鲡肠道蛋白酶的分离纯化及其酶学性质研究[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2015,43(1):45-52. |
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| 作者姓名： | 林建城 王国玲 闵志勇 |
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| 作者单位： | 莆田学院 环境与生物工程学院,莆田学院 环境与生物工程学院,莆田学院 环境与生物工程学院 |
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| 基金项目： | 福建省区域科技重大项目(2009N3002) |
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| 摘 要： | 【目的】从日本鳗鲡(Anguilla japonica)肠道中分离纯化蛋白酶并分析其酶学性质,为日本鳗鲡饲料的科学研制提供理论依据。【方法】通过硫酸铵沉淀分级分离及Sephadex G-100和Sephadex G-75两级凝胶柱层析纯化日本鳗鲡肠道蛋白酶,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS-PAGE鉴定蛋白酶纯度和亚基分子质量,利用凝胶层析法测定酶的分子质量,用等电聚焦电泳法测定酶的等电点,并研究以酪蛋白为底物时蛋白酶催化反应的动力学参数及pH、温度、金属离子和修饰剂对蛋白酶活力的影响。【结果】日本鳗鲡肠道蛋白酶亚基分子质量为65.3ku,酶分子质量为260.3ku,等电点为8.23;该蛋白酶的最适pH为8.2,最适温度为55℃,米氏常数(Km)为4.832mg/mL,最大反应速度(Vmax)为0.269U/min。日本鳗鲡肠道蛋白酶在pH为6.6~9.0时表现稳定,在20~55℃时具有较好的热稳定性,在60℃以上稳定性迅速下降。Mg2+、Ca2+、Co2+、Ba2+、Mn2+、Cu2+、Zn2+和Hg2+对日本鳗鲡肠道蛋白酶的活力表现出不同程度的抑制作用,其中以Hg2+的抑制作用最强,1 mmol/L Hg2+可使酶活力丧失87.63%;而Fe2+有激活作用,5mmol/L Fe2+可使酶活力提高134.53%。修饰剂EDTA、对氯汞苯甲酸(pCMB)和Cys对酶活力没有影响,苯甲酰基磺酰氟(PMSF)和二硫苏糖醇(DTT)对酶活力则有不同程度的抑制作用。【结论】日本鳗鲡肠道蛋白酶由4条相同肽链组成,属于丝氨酸蛋白酶类,二硫键是维持其活性所必需的,酶活力易受环境中酸碱度、温度和金属离子调控。
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| 关 键 词： | 日本鳗鲡 蛋白酶 分离纯化 酶学性质 |
| 收稿时间： | 9/9/2013 12:00:00 AM |
Purification of protease from intestine of Anguilla japonica and its enzymatic characteristics |
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| LIN Jian-cheng,WANG Guo-ling and MIN Zhi-yong,et al.Purification of protease from intestine of Anguilla japonica and its enzymatic characteristics[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2015,43(1):45-52. |
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| Authors: | LIN Jian-cheng WANG Guo-ling and MIN Zhi-yong |
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| Institution: | LIN Jian-cheng;WANG Guo-ling;MIN Zhi-yong;College of Environment & Biological Engineering,Putian University; |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Anguilla japonica protease purification enzymatic characteristics |
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