| 利用免疫荧光标记技术分析TVDV在介体蚜虫消化道内的分布 |
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| 引用本文： | 熊锋,吴维,毛倩卓,刘琴利,陈海如,魏太云,李凡.利用免疫荧光标记技术分析TVDV在介体蚜虫消化道内的分布[J].云南农业大学学报,2018(2). |
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| 作者姓名： | 熊锋 吴维 毛倩卓 刘琴利 陈海如 魏太云 李凡 |
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| 作者单位： | 云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室;福建农林大学植物病毒研究所 |
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| 摘 要： | 【目的】制备TVDV CP蛋白抗血清,明确TVDV侵入蚜虫消化道的部位以及TVDV在蚜虫体内的分布。【方法】首先构建原核表达载体p DEST17-TVDV-CP,所得载体转化到Rocceta菌株中诱导表达TVDV CP蛋白,收集目的蛋白免疫小鼠制备TVDV CP特异性抗血清。再利用制备的抗血清,通过免疫荧光技术标记TVDV,对TVDV在介体蚜虫中的分布解剖观察。【结果】TVDV CP蛋白在Rocceta菌株中,IPTG溶度为1、0.5、0.2、0.1 mmol/L,温度为28℃都能成功诱导表达;所得抗血清对TVDV侵染蚜虫总蛋白进行western blot检测,检测到大小约24 ku特异性条带;对免疫荧光标记的蚜虫消化道进行共聚焦观察,在蚜虫中肠上皮细胞检测到标记的TVDV荧光信号。【结论】制备了TVDV CP特异性抗血清,明确了TVDV分布于介体蚜虫消化道的中肠,由介体蚜虫以循回方式传播。
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