| 猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白的高效表达及间接ELISA方法的建立 |
| |
| 引用本文： | 夏平安,尹彦涛,李素平,党占国,王建举,王中明,李伟娟,崔保安.猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白的高效表达及间接ELISA方法的建立[J].中国兽医学报,2009,29(5). |
| |
| 作者姓名： | 夏平安 尹彦涛 李素平 党占国 王建举 王中明 李伟娟 崔保安 |
| |
| 作者单位： | 河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002 |
| |
| 摘 要： | 根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 美洲株 ATCC VR2332 的 N 蛋白基因序列,设计合成1对特异性引物,用RT-PCR方法从PRRSV Hn-1/06株中克隆了大小为372 bp的 N 蛋白基因(EU025136).将 N 蛋白基因亚克隆到原核表达载体pET-32a中构建了重组表达质粒pET-N,在IPTG的诱导下成功表达了相对分子质量约为33 000的可溶性融合蛋白N-His;经SDS-PAGE和凝胶薄层扫描分析,融合蛋白的表达量约占细菌总蛋白量的29%.将融合蛋白加入镍琼脂糖凝胶树脂层析柱,经300 mmol/L咪唑磷酸盐缓冲液洗脱,其纯度可达,91%.用Western blotting分析纯化后的融合蛋白,显示良好的生物学活性.利用纯化融合蛋白作包被抗原及优化ELISA反应条件,建立了可检测抗PRRSV N 蛋白抗体的间接ELISA方法(N-ELISA),并将所建立的N-ELISA与国外进口的PRRS检测试剂盒IDEXX-ELISA对200份临床送检血清进行平行检测,阳性符合率为92.7%.结果表明,本试验建立的N-ELISA与IDEXX-ELISA具有同样高的特异性.
|
| 关 键 词： | N蛋白 原核表达 |
High-level expression of N protein of PRRSV Hn-1/06 strain and establishment of ELISA diagnosis based on the recombinant fusion protein |
| |
| XIA Ping-an,YIN Yan-tao,LI Su-ping,DANG Zhan-guo,WANG Jian-ju,WANG Zhong-ming,LI Wei-juan,CUI Bao-an.High-level expression of N protein of PRRSV Hn-1/06 strain and establishment of ELISA diagnosis based on the recombinant fusion protein[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2009,29(5). |
| |
| Authors: | XIA Ping-an YIN Yan-tao LI Su-ping DANG Zhan-guo WANG Jian-ju WANG Zhong-ming LI Wei-juan CUI Bao-an |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | PRRSV ELISA |
| 本文献已被 维普 万方数据 等数据库收录！ |
|
