| 猪Ⅱ型圆环病毒全基因组序列分析及其ORF1和ORF2基因的克隆与表达 |
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| 引用本文： | 韩凌霞,陈艳,崔尚金,王云峰,仇华吉,童光志.猪Ⅱ型圆环病毒全基因组序列分析及其ORF1和ORF2基因的克隆与表达[J].中国预防兽医学报,2004,26(1). |
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| 作者姓名： | 韩凌霞 陈艳 崔尚金 王云峰 仇华吉 童光志 |
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| 摘 要： | 猪Ⅱ型圆环病毒(PCV-2)的2个主要开放阅读框ORF1和ORF2分别编码病毒的复制酶Rep和结构蛋白Cap.本试验将分离株L株病毒感染PK15细胞系,提取总DNA并以其为模板,通过PCR分别扩增了全病毒基因组、完整的Rep和Cap基因,并克隆到pMD18T载体中,进行了序列测定.将Rep和Cap基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pPROEXTMHT中,以融合蛋白的形式表达了这两种蛋白.根据文献报道,致病性的PCV-2与无致病性的PCV1的型特异性抗原决定簇主要位于Cap基因的羧基端部分,本实验利用原核表达载体pGEX-6p-1融合表达了Cap基因羧基端423bp的片段.通过薄层扫描各重组菌诱导表达产物的SDS-PAGE结果,重组质粒pPRO-Cap和pPRO-Rep以及pGEX-△Cap的外源基因表达量分别占总菌体总蛋白的15.1%、30.4%和19.6%.将表达的三种蛋白作为抗原,通过酶联免疫吸附试验分别与PCV-2阳性猪血清和SPF猪血清进行了反应,pGEX-△Cap表达的蛋白(Cap蛋白的羧基端部分)抗原反应性最强,这表明截短的Cap蛋白羧基端部分将是一个良好的诊断PCV-2感染用候选抗原.
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| 关 键 词： | 原核表达 诊断抗原 |
Genomic sequence determination of PCV-2 and expression of ORF1 and ORF2 genes in E.Coli |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PCV-2 |
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