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| 短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX几丁质酶基因(chiD)的克隆与原核表达 | |
| 引用本文： | 黄丹丹,车建美,刘波,陈庆河.短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX几丁质酶基因(chiD)的克隆与原核表达[J].热带作物学报,2014,35(9):1757-1763. |
| 作者姓名： | 黄丹丹 车建美 刘波 陈庆河 |
| 作者单位： | 1. 福建省农业科学院农业生物资源研究所,福建福州 350003;福建农林大学生命科学学院,福建福州 350002 2. 福建省农业科学院农业生物资源研究所,福建福州,350003 3. 福建省农业科学院植物保护研究所,福建福州,350003 |
| 基金项目： | 国家自然基金项目（No. 31370059）；中国热带农业科学院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（No. 1630042012006）；农业部引进国际先进农业科学技术重点项目（No. 2011-G25）；福建省科技计划区域重大项目（No. 2011N3007）。 |
| 摘 要： | 以短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到几丁质酶基因chiD序列,再将chiD序列连接到pMD18-T克隆载体上,形成重组载体pMD18-T-chiD,转化大肠杆菌DH5ɑ并测序,经过核苷酸和氨基酸序列分析获得几丁质酶基因chiD的序列片段为1 524 bp,编码507个氨基酸,理论蛋白质分子量约54.55 ku,其等电点约为5.77,表明该几丁质酶为酸性几丁质酶。将重组质粒pMD18-T-chiD双酶切后与表达载体pET-28a连接,构建重组表达载体pET28a-chiD,并转入大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,结果表明:重组蛋白质的分子量约55 ku,与预测的蛋白分子量结果一致。为了提高重组蛋白的表达量,对培养时间、IPTG浓度和温度3个参数进行优化,并将表达产物进行SDS-PAGE分析,最后得出重组载体pET28a-chiD的最佳诱导表达参数分别为8 h、0.5 mmol/L和28℃。这为短短芽胞杆菌来源的几丁质酶的进一步研究奠定了良好基础。 |
| 关 键 词： | 短短芽胞杆菌 几丁质酶基因 克隆 表达 IPTG诱导 |
Cloning and Prokaryotic Expression of Chitinase Gene (chiD) from Brevibacillus brevis FJAT-0809-GLX |
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| HUANG Dandan,CHE Jianmei,LIU Bo and CHEN Qinghe.Cloning and Prokaryotic Expression of Chitinase Gene (chiD) from Brevibacillus brevis FJAT-0809-GLX[J].Chinese Journal of Tropical Crops,2014,35(9):1757-1763. | |
| Authors: | HUANG Dandan CHE Jianmei LIU Bo and CHEN Qinghe |
| Abstract: | |
| Keywords: | Brevibacillus brevis Chitinase gene Clone Express IPTG induction |
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