| 猫冠状病毒核衣壳蛋白的可溶性表达与多克隆抗体反应性鉴定 |
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| 引用本文： | 张丹,卢舒婷,卢辰赫,王子仪,徐丽华,陈伊玄,王圣文,金子安,倪成章,周继勇,郑肖娟.猫冠状病毒核衣壳蛋白的可溶性表达与多克隆抗体反应性鉴定[J].浙江大学学报(农业与生命科学版),2023(3):424-434. |
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| 作者姓名： | 张丹 卢舒婷 卢辰赫 王子仪 徐丽华 陈伊玄 王圣文 金子安 倪成章 周继勇 郑肖娟 |
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| 作者单位： | 1. 浙江大学动物医学中心,农业农村部动物病毒学重点实验室;2. 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所;3. 浙江大学海南研究院 |
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| 基金项目： | 浙江大学大学生科研训练计划（SRTP）项目（Y34462）； |
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| 摘 要： | 为制备猫冠状病毒（feline coronavirus, FCoV）核衣壳（nucleocapsid, N）蛋白的特异性抗体，本研究将Ⅰ型FCoV(ZJU1709)的N蛋白基因全长c DNA亚克隆到pCold TF原核表达载体上，通过低温诱导表达、镍柱亲和纯化获得可溶性重组N蛋白；进一步以纯化的重组N蛋白为免疫原制备兔多克隆抗血清（多抗血清），再通过酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）、蛋白质印迹法（Western blotting, WB）、间接免疫荧光试验（indirect immunofluorescence assay, IFA）等多种方法对兔多抗血清进行反应性鉴定。结果显示：经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside, IPTG）和低温诱导，成功表达出分子量约为100 kDa的可溶性重组N蛋白，在非变性条件下亲和纯化获得的重组N蛋白质量浓度达到1.4 mg/mL;N蛋白兔多抗血清的ELISA效价可达1×106，与真核表达的重组蛋白Flag-N以及FCoV...
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| 关 键 词： | 猫冠状病毒 核衣壳蛋白 可溶性表达 多克隆抗体 交叉反应性 |
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