| 片形吸虫"中间型"组织蛋白酶L2基因的原核表达及鉴定 |
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| 引用本文： | 王晓旭,曾敏浩,吕庆博,邱鸿宇,常巧呈,王春仁.片形吸虫"中间型"组织蛋白酶L2基因的原核表达及鉴定[J].黑龙江八一农垦大学学报,2019,31(6). |
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| 作者姓名： | 王晓旭 曾敏浩 吕庆博 邱鸿宇 常巧呈 王春仁 |
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| 作者单位： | 黑龙江八一农垦大学动物科技学院,大庆,163319 |
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| 摘 要： | 组织蛋白酶L2(CathepsinL2,CatL2)存在于片形吸虫发育的各个时期,具有潜在的免疫保护性及诊断性。为了获得片形吸虫"中间型"("intermediate form"of Fasciola,Fsp)CatL2基因的重组蛋白,根据GenBank中公布的肝片形吸虫组织蛋白酶L2基因设计特异性引物,应用RT-PCR获得虫体的FspCatL2基因,经TA克隆后,进行测序及生物学分析;进一步构建原核表达重组质粒PET-28a(+)-FspCatL2,在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行诱导表达,将纯化后的蛋白进行SDS-PAGE和Western Blot分析。结果表明扩增得到的FspCatL2基因的大小为933 bp,编码311个氨基酸,生物信息学显示FspCatL2有较多的α-螺旋,具有较好的抗原表位,推测该蛋白应有较好的抗原性。SDS-PAGE结果显示在35 kDa处有目的条带,Western Blot分析发现重组FspCatL2与片形吸虫"中间型"阳性血清发生反应,而与阴性血清不发生反应。实验成功克隆表达了片形吸虫"中间型"组织蛋白酶L2,为进一步研究其功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | 片形吸虫中间型 组织蛋白酶L2 表达分析 |
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