| 猪CCL17基因的克隆与原核和真核表达 |
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| 引用本文： | 李燕丽,孙 柏,张亚杰.猪CCL17基因的克隆与原核和真核表达[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2010,38(7):27-32. |
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| 作者姓名： | 李燕丽 孙 柏 张亚杰 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 动物医学院;西北农林科技大学 动物医学院;西北农林科技大学 动物医学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(30270342)；西北农林科技大学引进人才基金资助项目(01140406) |
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| 摘 要： | 【目的】克隆猪胸腺活化调节趋化因子CCL17基因,研究其在原核及真核系统中的表达。【方法】提取仔猪脾脏组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增CCL17,并将其与已知序列的CCL17进行同源性比较;CCL17基因经测序验证后,将其分别克隆入表达载体pET-32a和pEGFP-C1,构建该基因的重组原核表达载体pET-CCL17和真核表达载体pEGFP-CCL17,分别进行双酶切和测序鉴定;前者在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达目的蛋白,后者以脂质体介导法转染至猪血管内皮细胞(SUVECs),通过绿色荧光标记和Western blot检测细胞中CCL17基因的表达水平。【结果】PCR扩增得到CCL17309bp的DNA片段;重组表达质粒pET-CCL17和pEGFP-CCL17经双酶切鉴定和测序分析证明,载体构建成功。pET-CCL17经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表明,目的蛋白在宿主大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达CCL17融合蛋白,分子质量约32ku,与其理论分子质量基本相符;pEGFP-CCL17转染SUVECs,经Westernblot检测,证实导入的CCL17基因得到了表达。【结论】克隆了猪的CCL17基因,利用大肠杆菌成功表达了CCL17重组蛋白,真核重组质粒在SUVECs中也得到了表达。
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| 关 键 词： | 猪 胸腺活化调节趋化因子 分子克隆 原核表达 真核表达 |
| 收稿时间： | 2009/12/24 0:00:00 |
Cloning and expression of prokaryotic and eukaryotic of swine gene CCL17 |
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| LI Yan-li,SUN Bai,ZHANG Ya-jie,ZHANG De-li.Cloning and expression of prokaryotic and eukaryotic of swine gene CCL17[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2010,38(7):27-32. |
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| Authors: | LI Yan-li SUN Bai ZHANG Ya-jie ZHANG De-li |
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| Institution: | (College of Veterinary Medicine,Northwest A&F University,Yangling,Shaanxi 712100,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | swine thymusand activation regulated chemokine molecular cloning prokaryotic expression eukaryotic expression |
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