| 小鼠TRIM59蛋白多克隆抗体的制备、鉴定与初步应用 |
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| 引用本文： | 姜 飞,刘小林,李喜莲.小鼠TRIM59蛋白多克隆抗体的制备、鉴定与初步应用[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2009,37(12):11-16. |
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| 作者姓名： | 姜 飞 刘小林 李喜莲 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 动物科技学院，陕西省农业分子生物学重点实验室;西安大略大学 生理与药学系;西北农林科技大学 动物科技学院，陕西省农业分子生物学重点实验室;西北农林科技大学 动物科技学院，陕西省农业分子生物学重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划“863”项目（2008AA10Z144）；加拿大卫生研究院基金项目(CIHR MOP77684)；西北农林科技大学博士基金项目 |
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| 摘 要： | 【目的】制备兔抗鼠三结构域蛋白59(Tripartite motif-containing 59,TRIM59)多克隆抗体。【方法】利用PCR方法得到小鼠TRIM59基因片段,将其克隆至pGEX-2T原核表达载体中,转入大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达GST-TRIM59融合蛋白。GST-TRIM59融合蛋白经亲和层析纯化浓缩后免疫新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体,通过ELISA测定兔抗鼠TRIM59多克隆抗体效价,用Western blot测定其特异性。用免疫组织化学方法检测TRIM59在小鼠前列腺癌组织中的表达。【结果】成功构建了pGEX-2T-TRIM59原核表达重组质粒,并诱导表达出GST-TRIM59融合蛋白,免疫新西兰大耳白兔5周后获得多克隆抗体。ELISA测定结果表明,TRIM59多克隆抗体效价为1∶106以上;Western blot分析表明,TRIM59多克隆抗体具有良好的特异性。免疫组织化学检测发现,TRIM59在小鼠前列腺癌组织细胞中高表达。【结论】成功地制备了特异性良好的兔抗鼠TRIM59多克隆抗体,其具有良好的免疫学活性,能够用于相关研究。
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| 关 键 词： | TRIM59基因 多克隆抗体 小鼠 肿瘤 |
| 收稿时间： | 2009/3/31 0:00:00 |
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