| VP35蛋白对Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒增殖的影响 |
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| 引用本文： | 姜霖,涂加钢,张永安.VP35蛋白对Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒增殖的影响[J].水产学报,2022,46(2):261-269. |
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| 作者姓名： | 姜霖 涂加钢 张永安 |
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| 作者单位： | 华中农业大学水产学院，农业微生物学国家重点实验室，湖北 武汉 430070 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (31930114，31725026) |
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| 摘 要： | Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV)基因片段S11编码外衣壳蛋白VP35。为深入探究VP35蛋白在病毒增殖中发挥的作用，实验扩增了S11基因并插入载体pCMV-3×flag中，构建pCMV-3×flag-S11真核表达质粒，转染草鱼肾细胞(CIK)后感染Ⅱ型GCRV，收集感染后的上清液与细胞。首先利用实时荧光定量PCR中相对定量的方法检测细胞样品中Ⅱ型GCRV-S6基因的mRNA。结果显示，过表达VP35在病毒mRNA水平促进Ⅱ型GCRV的增殖；然后扩增S6基因并插入到载体pET-32a(+)中，构建重组原核表达质粒，纯化Ⅱ型GCRV-VP4蛋白并制备多克隆抗体，用Western blot检测收集的细胞样品中的VP4蛋白，结果表明过表达VP35在病毒蛋白水平促进Ⅱ型GCRV的增殖；最后使用pET-32a-S6质粒作为阳性标准质粒并制作标准曲线，建立Ⅱ型GCRV病毒基因拷贝数的绝对定量检测方法，利用该方法检测细胞上清液中的病毒颗粒，结果表明过表达VP35增加Ⅱ型GCRV病毒拷贝数。本研究从3个维度证明过表达VP35蛋白促进Ⅱ型GCRV增殖，有助于深入解析VP35蛋白功能，也为进一步探究Ⅱ型GC...
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| 关 键 词： | 草鱼 Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒 VP35蛋白 VP4蛋白 多克隆抗体 增殖 |
| 收稿时间： | 2021/6/30 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2021/9/18 0:00:00 |
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